7.液相色谱法.ppt

第四节: 色谱分离方法的选择 二、溶解度 水溶性样品最好用离子交换色谱法和液液分配色谱法。 微溶于水，但在酸或碱存在下能很好电离的化合物，也可用离子交换色谱法。 油溶性样品或相对非极性的混合物，可用液-固色谱法。 * 第四节: 色谱分离方法的选择 三、化学结构 样品中包含离子型或可离子化的化合物，或者能与离子型化合物相互作用的化合物(例如配位体及有机螯合剂)，首先考虑用离子交换色谱，但空间排阻和液液分配色谱也都能顺利地应用于离子化合物。 异构体的分离可用液固色谱法。 具有不同官能团的化合物、同系物可用液液分配色谱法。 对于高分子聚合物，可用空间排阻色谱法。 * * 油溶性样品的分离方法选择图 * 水溶性样品的分离方法选择图 第五节:液相色谱仪的日常维护 一、流动相 二、储液器 三、高压泵 四、进样器 五、色谱柱 * 色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相。 作流动相的物质有气体、液体、超临界流体。 因此，日常维护时要对流动相进行以下处理： 1 溶剂的纯化（分为分析纯和优级纯溶液，乙氰是常用的溶剂） 2 流动相的脱气 3 流动相的过滤 4 流动相的更换 流动相脱气 超声波振荡脱气 惰性气体鼓泡吹扫脱气 在线真空脱气 在线真空脱气装置的原理：将流动相通过一段由多孔性合成的树脂膜构成的输液管，该输液管外有真空容器。真空泵工作时，膜外侧被减压，相对分子质量小的氧气，氮气，二氧化碳就会从膜内进入膜外从而被排除。 储液器安装在冷凝器和挥发器之间，靠近冷凝器，用来储存液体冷媒，并且将冷媒里的水份吸掉，也叫高压储液器或统储液器。 储液器分为上下隔层，主要使用吸收水分的媒体。储液器中从上部流入已加压的冷媒，只有液体(Liquid)通过下面的排管流到蒸发器里。在这一过程中，储液器会同时清除水分与蒸汽气泡。另外储液器上部装有 Clutch Cycling Pressure S/W，下部使用过滤器。储液器通常按其结构分为：壳体与弯管的组合和型管或Z型管的组合两大类。 色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。 色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。 Ⅰ· 常用液相色谱联用 Ⅱ· LC-MS联机系统 Ⅲ· LC-MS接口技术 Ⅳ· LC-MS技术的应用 * 第六节 液相色谱联用技术 * 常用液相色谱联用技术 Text Text Text 液相色谱-质谱联用（lC-MS）要比气相色谱-质谱联用困难得多，主要是因为流动相是液体，如果让流动相直接进入质谱，将会破坏质谱系统的真空，也将干扰质谱分析。因此其技术发展比较慢，直到电喷雾电离(ESL)接口和大气压电离(APL)接口出现，才有成熟的商品液相色谱—质谱联用仪。由于有机化合物的80%不能气化，和近几年生命科学中的分离和纯化的发展，加之该仪器的接口问题得到了解决，所以促使液相色谱—质谱联用仪有了飞速的发展。 红外光谱在有机化合物的结构分析中有着重要的作用，而色谱又是有机化合物分离纯化的最好方法，因此色谱与红外光谱的联用一直是关注的问题，由于液相色谱不受样品挥发度和热稳定性的限制，因此适合与那些沸点高、极性强、热稳定性差、大分子式样的分离、也对多数化合物、尤其是生化活性物质均能被较好的分离和分析。其分离特点及定性鉴别的有效结合，使对复杂物质的定性分析、定量分离得以实现，成为气相色谱-傅里叶变换红外光谱互补的分离鉴定手段。 原子光谱主要用于金属或非金属元素的定性、定量分析，而色谱主要用于有机化合物的分析，分离和纯化，因此过去很少有人研究、近年人们发现某些元素（如铅、汞等）对人的健康影响和对环境危害程度有很大的差别、所以对这些进行研究、这时色谱就成为最有力的分离方法，而且分离和分析后又是原子光谱的特长、因此近年有关色谱-原子光谱联用技术相应出现和发展。 ④ 色谱-色谱联用 液相色谱-质谱联用技术的研究开始于20世纪70年代，与气相色谱-质谱联用技术不同的是液相色谱-质谱联用技术似乎经历了一个更长的实践过程、知道90年代才广泛出现。 按照联用的要求，LC-MS的在线使用首先要解决的问题是真空的匹配。现在有仪器设计采用了分段、多级抽真空的方法。形成真空梯度来满足接口和质谱正常工作的要求。除真空匹配外，液质联机技术发展可以说就是接口技术的发展。使热不稳定和强极性化合物在不加衍生化的情况下得以直接分析并将质谱分析用于生物大分子是液质接口技术的发展方向。某些特定的接口可使蛋白质及其他生物大分子得以多重质子化，产生多