发酵罐的使用.docVIP

发酵罐的使用 实验原理 发酵罐是由3条线路构成的，一个是空气的进出（不进入夹层），蒸汽的进出（只在对空气过滤器灭菌时才进入罐体，是 从夹层的上进下出的），水的进出（进入夹层内，从下进上出。当开始发酵时，水路会形成一个循环，由温度感应器对其进行调节，保证水的温度在发酵所需温度范围内）。 实验设备 我们实验室所用的发酵罐是由蒸汽发生器、空气压缩机、储气罐和发酵罐和控制面板组成的。 蒸汽发生器：黄灯亮代表需要进水，进水好后红灯亮，自动开始加热。其背后有一阀门，是控制蒸汽流出的开关，常开。 空气压缩机：摁下红色按钮起开始向储气罐内通入空气 储气罐：由于实验器材老化，处于安全考虑，压力控制在2Kg（0.2Mpa），超过这一压力则要关闭空气压缩机。储气罐底部有一出气的安全阀，此阀是常开的。 发酵罐:发酵罐上连有电极，当要打开发酵罐时要先将其拆下，避免损坏。在旋紧发酵罐时要对角线旋紧旋钮。 三、实验步骤 实验前的预备工作 清洗发酵罐：将发酵罐的电极拆下，旋钮选出，对发酵罐进行清洗 检查气密性 将阀门F14（发酵罐的出气阀）与发酵罐夹层的出水阀打开，在实验过程中这是一直要打开的 打开电源总闸，打开蒸汽发生器水龙头，将水通入蒸汽发生器内，红灯亮时关闭水龙头 将空气压缩机的开关打开，向储气罐内通入空气，当压力到2Kg（0.2Mpa）时，关闭空压机。 通过进样孔向发酵罐内通入一定量的去离子水，使其没过空气管口。 先打开发酵罐的进气阀门F11、F13，再打开储气罐连接发酵罐的管道阀门. 当罐内压力上升到0.05MPa时，关闭F14,F13，将发酵罐底部取样旋钮旋至最下放方以防漏气，此时罐内压力在30min内保持不变则气密性良好。 发酵罐的灭菌 空消： 30min后，打开F14,F13阀门，调节大小使其稳定在0.03MPa 在打开蒸汽发生器的阀门前，先将发酵罐的蒸汽出口阀门打开 打开蒸汽发生器的阀门与发酵罐的进气阀门，关闭进气阀F13以防倒吸，当温度上升到121℃时，保持30min，注意调节F14，使罐内压力维持在一定的压力值（过大会有危险，过小温度难以上升）此时发酵的前期准备工作已就绪，开始准备发酵。 30min后，泄压；关闭蒸汽发生器的阀门与发酵罐蒸汽进入阀门，打开F13进空气的阀门 防止罐体变形 发酵步骤 实消 冷却发酵罐（防止过热物料喷出），从加样孔内通入物料（物料要先全部溶解）于6L左右，打开搅拌器； 打开蒸汽发生器的阀门与发酵罐蒸汽进入阀门，关闭F13以防倒吸； 当罐内温度上升到90℃时，停止搅拌以防电极被烧坏； 对空气过滤器灭菌；当温度上升到100℃时，打开空气过滤器的阀门F3，关闭进气阀F11，再打开进气阀F13,对空气过滤器灭菌15min。 实消；15min后，关闭空气过滤器的阀门F3与进气阀F13，打开F11，当温度上升到121℃时，保持30min，进行实消的灭菌。 30min后，泄压，打开F13进气阀，再对罐体进行降温；关闭所有的蒸汽进口阀，打开水龙头，打开冷凝水的进出口阀（先出后进）。 接种 对罐体进行降温，冷却到30℃左右； 接种；在进样孔旁围上一圈脱脂棉，倒上酒精，点火对加样孔进行灭菌，灭菌后，由进样孔进行接种。 开始发酵 设置参数，温度设置在37℃，打开循环水路的阀门，水龙头关小，开始发酵； 取样；没两小时取样一次，取样前要相对管道进行灭菌，打开取样器的阀门，打开蒸汽进口阀，对管道灭菌15min，在冷却5min后方可取样，每次取样前都要对管道进行灭菌。将出样旋钮旋上，打开取样器的阀门，用离心管或试管接样，冷却后放入冰箱，每12h镜检一次，48h后统一检测OD值。 发酵结束 发酵结束后，将样品全部放出； 关闭进水阀，对夹套进行排水，最后关闭除出水阀外的所有阀门； 将发酵罐电极拆下，清洗发酵罐。 四、注意事项 从准备到最后有三个阀门一直都是打开的，一个是储气罐底部的阀门，一个是发酵罐的蒸汽出口阀门，一个是发酵罐的空气出口阀门F14（只在检查气密性时关闭过）。 当对发酵罐进行空消和实消是空气的出口阀门都是打开的，防止发酵罐变形，进口阀门多是关闭的，防止倒吸。 注意在两个地方要防止倒吸， 在对空气过滤器进行灭菌时要先打开蒸汽进气阀F3，关闭F11,再打开F13进气阀 实消完后要先将进气阀门都打开后才能打开空气进气阀F13. 阀门的打开都是先出后进，先开出口阀再开进口阀，关闭时则相反，是先关进口再关出口 进行空消是要注意罐内的压力，因为水变成蒸汽后会升大罐内的压力。 实消时打开搅拌器使罐内物料受热均匀，当注意要在90℃要关闭，以防烧坏电极。 发酵所需的压力是有实验得出的。