发酵工程实验之果汁澄清详解.doc

发酵工程学实验 组号： 7-8节第七小组 学号： 124120434 学院： 生命科学学院 专业、班级： 12生物技术 实验课程名称＿ 发酵工程实验 指导教师及职称 唐湘华 开课学期 2014 至 2015 学年 下 学期 云南师范大学教务处编印 实验名称：（一）特定产物工业生产菌种发酵及应用性质研究 实验时间 第十三周 实验室 睿智3-121 小组合组 是 小组成员 高胜全 李朝和 刘云谣 罗光洪 张志豪 实验目的： 1、掌握菌种选育、菌种发酵条件的优化和微生物酶制剂酶活测定的基本方法； 2、了解酶学性质的研究. 实验原理： 1、理论依据 （1）、果胶酶概况 （2）、果胶酶的酶活测定方法 （3）、微生物发酵生产特定产物受培养基成分、培养条件和附加条件等的制约 （4）、酶催化反应的进行受多种因素的影响 2、果胶酶概况 果胶质：是高等植物细胞壁内及细胞壁间的结构性多糖，是一类高分子碳水化合物，它的存在往往给果蔬加工等工艺带来许多麻烦和损失。 果胶酶：是指能分解果胶质的多种酶的总称，广泛存在于高等植物和微生物中。 产生果胶酶的微生物：细菌、放线菌、酵母和霉菌，但目前商品果胶酶多数来自霉菌。 果胶酶的应用：主要是用于果胶的分解，在水果加工、葡萄酒生产、麻类脱胶和饲料等方面有着广泛的应用。 果胶酶的酶活测定方法 粘度降低法：利用粘度计测量在一定温度、酶浓度和一定反应时间内，标准果胶溶液的粘度降低值。 脱胶作用时间法：以脱胶作用的时间来测定果胶酶的酶活力。 次亚碘酸法：用滴定法定量测定半乳糖醛酸的生成量，以表示果胶酶的活力。 还原糖法（DNS法）：测定在一定温度、酶浓度和一定反应时间内，水解果胶产生的还原糖的量。 DNS法：根据果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，后者是一种还原糖，与3，5 -二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm进行测定。 微生物发酵生产产品受以下条件制约： 培养基成分：C源、N源、无机盐、水和生长因子 培养条件：温度、pH、溶解氧等 附加条件：诱导物、表面活性剂等 5、酶催化反应的进行受多种因素的影响 底物浓度 酶浓度 温度 pH 激活剂 抑制剂 实验材料 （一）试剂 1、酶活测定用试剂和DNS 2、新鲜果汁 （二）仪器 烧杯、三角瓶、试管、移液管、洗耳球、量筒、容量瓶、试剂瓶、研钵等； 天平、灭菌锅、超净工作台、培养箱、电炉、恒温水浴锅、记时器（精确到秒）、分光光度计等。 （三）培养基 1、菌种筛选使用 2、黑曲霉Asp-2固体发酵用 1、菌种筛选使用培养基 ⑴ 基本培养基: 果胶 1% ，磷酸氢二钠0.5%，蛋白胨1%，pH4.5，琼脂 2.0%。 ⑵分离培养基 果胶 0.5%，磷酸氢二钠0.5%，琼脂2.0%，pH4.5 （3）发酵培养基 果胶 1% ，磷酸氢二钠0.5%，蛋白胨1%，pH4.5。 黑曲霉Asp-2固体发酵培养基 菌种斜面培养基（查氏培养基） NaNO3 0.2% K2HPO4 0.1% KCl 0.05% MgSO4 0.05% FeSO4 0.001% 蔗糖 3% 琼脂 2.5% 自然pH 种子培养基 麸皮 3.0% ，橘子粉 2.0% ，硫酸铵0.5%, 葡萄糖 1% ，KH2PO4 0.1% pH4.5 固体发酵培养基：5瓶 / 组 麸皮 10g，橘子粉 2.5g，(NH4)SO4 0.1g（0.8%干料计） 葡萄糖 0.125g（1%干料计），水 15ml 要求： 按组统一配制后分装三角瓶 先将(NH4)SO4 、葡萄糖用水溶解，再加其它。 实验方法、步骤及注意事项： 固体发酵果胶酶 菌种准备 菌种活化：试管保存菌种→斜面活化→30℃培养约60h 液体培养：将菌种接种入装有50mL种子培养基的250mL三角瓶内，30℃，200rpm，培养约40h，备用。 氮源的选择和选择的氮源添加量对产酶的影响(第一组） 选择硫酸铵、蛋白胨、牛肉膏按照1%浓度替换发酵培养基中的蛋白胨，接种5%液体种子