仪器第十一章色谱法分离原理课件.ppt

第十一章 色谱法分离原理 学习目的 通过本章学习，应了解色谱法的分类，理解色谱法分离过程及分离原理，掌握色谱图及相关术语，掌握分离度概论及应用，掌握色谱法定性及定量分析。 本章主要内容 11.1 色谱法概述 11.2 线性洗脱色谱及相关术语 11.3 色谱法基本理论 11.4 分离度 11.5 色谱法定性和定量分析 11.1 色谱法概述 一、历史回顾 二、色谱法(Chromatography) 色谱法的实质是分离，是一种重要的分离、分析技术。它是根据混合物各组分在互不相溶的两相—固定相与流动相中吸附能力、分配系数或其它亲合作用性能的差异作为分离的依据。 当混合物各组分随着流动相通过固定相时，在流动相与固定相之间进行反复多次的分配，这样就使得那些吸附能力或分配系数只有微小差别的物质，在移动速度上产生了较大的差别，从而得到分离。 三、色谱法的分类 色谱法有许多类型，从不同的角度可以有不同的分类方法，主要包括以下几类： 1.按流动相和 固定相的物态 11.2 线性洗脱色谱及相关术语 一、色谱分离过程 现以在填充柱内进行的分配色谱来说明色谱的分离过程。 固定相：涂在惰性载体上的液体 流动相：气体，其连续不断地流经固定相 两相充分接触，但互不相溶。 1.将混合物一次注入色谱柱后，流动相不断地流入色谱柱。由于试样分子与两相分子间的相互作用，它们既可以进入固定相，也可以返回流动相，这个过程叫分配。 当样品进入流动相时，它就随流动相一起沿柱子向前移动；当它进入固定相时，就被滞留而不再向前移动。 与固定相分子作用力越大的组分，越易进入固定相，向前移动的速度越慢；与流动相分子作用力越大的组分，越易进入流动相，向前移动的速度越快。 这样经过一定的柱长后，由于反复多次的分配，即使原来性质（如沸点、溶解度、分子结构及极性等）差异微小的组分，也能达到很好的分离。如图所示 2.色谱分离过程的特点 ①不同组分在通过色谱柱时移动速度不同 ②各组分分子沿柱子的扩散分布 3.分配系数（参见教材478-479页） 上述色谱分离过程涉及到组分在两相之间的分配平衡，可以用分配系数K来定量讨论 分配系数：K=cs/cm 是指在一定T、P下组分在两相间达到平衡时，在两相中的浓度比，为热力学参数。 二、色谱图及相关术语 1.色谱图 2.相关术语 (1)基线：色谱柱中仅有流动相通过时，检测器响应信号的记录值。稳定的基线应是一条水平直线。 (2)峰高：色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示。 (3)保留值 ①死时间tM：不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到色谱图上出现峰极大值所需的时间。 对于气相色谱，tM是指从进样到空气峰（对热导检测器）最高点所经过的时间。 tM=L/ū ②保留时间tR：试样从进样开始到柱后出现峰极大值时所经历的时间。 ③调整保留时间tR′：组分的保留时间与死时间之差。 tR′= tR- tM（单位可用时间或距离） 注：保留时间是色谱法定性分析的基本依据，但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响，在GC中尤为显著，因此，常用保留体积等参数进行定性鉴定。 ④保留体积VR：从进样开始到色谱峰最大值出现时所通过的流动相的体积，单位mL。 VR=Fc·tR 注：对于液体，可以认为不可压缩，所以在LC中，Fc即为实测值；对于GC，由于气体可压缩，因此必须根据色谱柱的工作状态，对实验值进行校正，才能得到Fc。 ⑤死体积VM：不被保留的组分通过色谱柱所消耗的流动相的体积。 VM=Fc·tM VM本意是指色谱柱中，未被固定相占据的空隙体积，即色谱柱内流动相的体积(Vm)。因此有：VM≈Vm ⑥调整保留体积VR′：保留体积减去死体积。 VR′=VR-VM=tR′·Fc ⑦相对保留值（?2,1）：某组分2的调整保留值与组分1的调整保留值之比。 ?2,1 = tR2′/ tR1′ 其值只与柱温及固定相的性质有关，与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，?2,1 是色谱法中，尤其是GC中广泛使用的定性参数。 在定性分析中，通常固定一色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对标准物峰的相对保留值（?s,i）。 一般情况下，选择一对最难分离的物质，将它们的相对保留值作为重要参数，此时用?来表示相对保留值。 ?= tR2′/ tR1′（ tR2′ tR1′ ） ?称为选择因子（ ? 1） 注：?值越大，越容易分离，若?=1，情况如何？ ⑧保留因子k （又称分配比、容量因子） 组分在固定相和流动相中的分配量之比 k = ns / nm ⑨保留值与分配系数K之间的关系 当某一组分的色谱峰最高点出现时，说明该组分恰好有一半的量洗脱在保留体积的流动相中，刚好流出色谱柱，其余一半则仍留在柱内。 根据物料等衡原理得：