实验5病原性球菌分析报告.pptVIP

实 验 五 病原性球菌 实验目的： 熟悉几种常见病原性球菌的形态染色特点。 掌握血浆凝固酶试验的原理、方法、意义。 掌握抗“0”试验的原理、方法及临床意义。 一、常见病原性球菌形态染色的观察（示教） （细菌的形态；革兰染色性；排列方式） 二、血浆凝固酶试验（示教) 三、抗“0”试验(操作) 实验内容： 球菌革兰染色标本片 葡萄球菌培养物、兔血浆、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、火柴、蜡笔 待测病人血清、抗“O”试剂（溶血素“O”、ASO胶乳）、反应板、搅拌棒 实验用品： 一、病原性球菌形态特征的观察 又称为化脓性球菌 根据革兰染色性的不同可分成 革兰阳性： 葡萄球菌 链球菌 肺炎链球菌 革兰阴性： 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 革兰染色阳性球菌，葡萄串状排列 无鞭毛， 不形成芽胞， 右上图：革兰染色 右下图：扫描电镜 形态与染色 葡萄球菌 革兰染色阳性球菌，呈链状排列 无鞭毛， 不形成芽胞， 右上图：革兰染色 右下图：扫描电镜 形态与染色 链球菌 形态与染色 肺炎链球菌 革兰染色阳性球菌，菌体呈矛头状，成双排列，宽端相对，尖端向外。无鞭毛不形成芽胞有毒株有荚膜 革兰染色阴性双球菌 呈肾形，成双排列 感染急性期 位于中性粒细胞内 形态与染色 奈瑟菌属 二、血浆凝固酶实验 血浆 纤维蛋白原 纤维蛋白 血浆凝固酶 附着于细菌表面 玻片上形成凝块（结合型） 试管中血浆发生凝固（游离型） 致病性葡萄球菌 原理 （1）取洁净玻片一张，玻片分为左右两区并做好标记，于一端加生理盐水一滴，另一端加兔血浆一滴。 （2）用接种环取金黄色葡萄球菌苔一环，在玻片一端生理盐水中研磨混匀，接种环灭菌后再取金黄色葡萄球菌苔一环，在另一端兔血浆中研磨均匀。 （3）立即观察结果。 血浆凝固酶实验方法（玻片法） 结果：细菌在生理盐水无凝集而在血浆中聚集成团块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性 血浆凝固酶实验注意事项 血浆多挑几环（一滴的量）；菌落不能太多。 要做阴性对照，有一部分葡萄球菌有自凝现象。 最好用抗凝的兔血浆 ，兔血浆凝块结实，凝固速度快 ；兔血浆应放4℃冰箱保存。 意义：血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，致病性葡萄球菌为阳性。 链球菌溶血素 链球菌溶血素O（SLO） 链球菌溶血素S（SLS） 抗原性强，产生抗O抗体，该抗体在感染链球菌2-3周 至病后1年内可检出； 正常参考值：成人200 U 风湿热患者抗O抗体250单位以上（高于正常人）， 活动期在400单位以上； 抗O试验常用于链球菌新近感染或风湿热的辅助诊断 氧敏感 氧稳定 三、抗链球菌溶血素“O”试验 （抗“O”试验，ASO） 　　抗链球菌溶血素“O”（ASO） 胶乳凝集法 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平 的抗体后，还有多余ASO(抗O抗体)，这些多余抗体即与ASO胶乳试剂(溶血素“O”与聚苯乙烯胶乳共价交联的产物)反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。 原理： 阴性对照 待测血清 各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加ASO胶乳1滴轻摇3min 观察结果 方法： 抗“O”试验 操作步骤： 1.在反应板上标记好反应区域； 2.分别在相应区域加：阴性对照1滴，待测血清一滴； 3.再各加一滴溶血素“O”，轻轻摇动1min，使其充分混匀。 4.再滴加ASO胶乳试剂1滴于每格内，轻摇3min，观察结果 。 抗“O”试验 结果： 阴性对照无凝集； 待测血清 凝集出现 ASO200IU/ml 阳性 无凝集出现