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2010第01章蛋白质的结构与功能-3
* * 蛋白质的分离纯化与结构分析 The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein 蛋白质的胶体性质与蛋白质沉淀 颗粒表面电荷 水化膜 蛋白质胶体稳定的因素: 盐析(salting out )是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 Dialysis透析and Ultrafiltration超滤法 Size Exclusion Chromatography 凝胶过滤 Molecular sieve Electrophoresis 电泳 + + + - - - Electrical field v Two-Dimensional Gel Electrophoresis双向电泳 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, SDSIsoelectric focusing 等电聚焦 pH 4 pH 10 Ultracentrifugation超速离心法 Sedimentation coefficient, S沉降系数 The tendency of any particle to move through a solution under centrifugal force. Relevant to the size and shape of proteins. 通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列 按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列 分离编码蛋白质的基因 测定DNA序列 排列出mRNA序列 二级结构测定 通常采用圆二色光谱(circular dichroism，CD)测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量。 ?-螺旋的CD峰有222nm处的负峰、208nm处的负峰和198 nm处的正峰三个成分；而?-折叠的CD谱不很固定。 X-ray crystallography X射线衍射法 同源模建：将待研究的序列与已知结构的同源蛋白质序列对齐——补偿氨基酸替补、插入和缺失——通过模建和能量优化计算，产生目标序列三维结构。序列相似性越高，预测的模型也越准确。 折叠识别：通过预测二级结构、预测折叠方式和参考其它蛋白的空间结构，从而产生目标序列的三维结构。 从无到有：根据单个氨基酸形成二级结构的倾向，加上各种作用力力场信息，直接产生目标序列三维结构。 根据蛋白质的氨基酸序列预测其三维空间结构： * * *
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