基本操作程序第3课时详解.ppt

找出以下问题答案，背课本11页---13页内容。 1.基因工程的核心？构建基因表达载体的目的？ 2.一个基因表达载体由几部分组成？ 3.启动子？终止子？标记基因的作用？ 4.所有的基因表达载体的构建是一样的吗？为什么？ 5.实施基因工程的第三步是什么? 6.什么叫转化？ 7.将目的基因导入植物细胞的方法？ 8.农杆菌有什么特点？ 叙述农杆菌转化法的过程。 9.将目的基因导入动物细胞的常用方法？操作步骤？ 10.原核生物作为受体细胞具有的特点（优点）？ 11.大肠杆菌作为受体细胞最常用的转化方法？ 基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ 目的基因 启动子 终止子 标记基因 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 注意 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少。 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 第三步 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞法 （Ca2+处理法） 农杆菌有什么特点？ 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 植物细胞 转基因植物 农杆菌 操作程序 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到输卵管或子宫内 新性状动物 将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 胚胎早期培养 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 将目的基因导入微生物细胞 用Ca2＋处理，增加细菌细胞壁的通透性 四、目的基因的检测与鉴定 总结： ①检测是否插入目的基因，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。 ②检测是否转录出了mRNA，利用分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交，看是否有杂交带。 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带。 ④还可以进行个体水平的鉴定，根据其性状。