四川农业大学研究生高级生物化学实验报告.docxVIP

实验一蛋白质相对分子质量的测定-凝胶层析法姓名：学号：专业：一、原理凝胶层析法(即凝胶过滤法，gel filtration)是根据生物分子大小不同而将其分离开的一种方法，又称为分子筛层析(molecular sieve chromatography)、排阻层析(exclusion chromate- -graphy)。凝胶本身具有一种网状结构(即分子筛)，它可以把生物分子按大小不同进行分离，好像过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”与普通的过筛不一样。将凝胶颗粒在适宜溶剂中浸泡，使充分吸液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱。在洗脱过程小．大分子由于直径大于凝胶孔径，所以不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒问的空隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，不论是天然凝胶还是人工合成凝胶，他们的内部都有很微细的多孔网状结构。凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶（agarose gel，商品名Sepharose），人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶(商品名Bio-gel-P)和葡聚糖凝胶(Sephadex G)，后者的商品名为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶，它具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。这种聚合物的立体网状结构，其孔隙大小与被分离物质分