基因工程 第二章 基因工程的酶学基础.ppt

末端转移酶同聚物加尾功能图解 T4多核苷酸激酶催化ATP的γ-磷酸基转移到DNA或RNA的5’-OH末端，使已脱磷酸化的5’末端重新磷酸化。这种作用不受底物分子链的长短的限制，即使单核苷酸也同样适用。 该酶常用于两种反应：正向反应和交换反应。 （1）正向反应：即催化5‘-OH末端的磷酸化，这是T4多核苷酸激酶的最主要功能。 （2）交换反应 ：当过量ADP存在时，DNA分子的5‘磷酸转移给ADP，然后脱磷酸化的DNA分子再从带有γ-32P的ATP中获得γ-32P基团，重新磷酸化DNA分子就获得了32P同位素标记。 二、T4多核苷酸激酶与DNA 5’端磷酸化 图2-9 T4多核苷酸激酶的正向反应活性（A）和交换反应活性（B） ﹡代表放射性同位素标记 碱性磷酸酶能够催化核酸分子脱掉5‘的磷酸基团，从而使DNA（或RNA）片段的5’－P末端转换成5‘－OH末端。 碱性磷酸酶有两种来源： 一种来源于大肠杆菌，叫做细菌碱性磷酸酶（bacterial alkaline phosphatase，BAP）； 另一种来源于小牛肠，叫做小牛肠碱性磷酸酶（calf intestinal alkaline phosphatase，CIP）。 三、碱性磷酸酶与DNA 5’端去磷酸化 碱性磷酸酶在基因工程中的用途主要有以下两个方面： （1）DNA分子片段5‘末端的去磷酸化，防止自身连接。 （2