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色谱法原理1
Chapter 10 Chromatographic Analysis Lecture 1Lectured by S Wu Section 10.1 Principles of chromatography 10.1 色谱法原理 Principles of Chromatography 1 概述 Overview 1903年,俄国植物学家兹维特分离植物色素; 后来出现了种类繁多的各种色谱法。 基本特点:具备两个相:固定相和流动相 固定相:Stationary phase 固定不动的相 流动相:Mobil phase 携带样品流过固定相的流动体。 当流动相中样品混合物经过固定相时,与固定相发生作用。由于各组分性质和结构上的差异,与固定相相互作用的类型、强弱也有差异,因此在同一推动力的作用下,不同组分在固定相滞留时间长短不同,从而按先后不同的次序从固定相中流出。 色谱发展史上占有重要地位的英国人A.J. P. Martin(马丁)和R.L.M. Synge(辛格),他们提出色谱塔板理论;发明液-液分配色谱;预言了气体可作为流动相(即气相色谱)。1952年,因为他们对分配色谱理论的贡献获诺贝尔化学奖。 色谱法的特点:Features 分离效率高;分析速度快;检测灵敏度高;样品用量少;选择性好;多组分同时分析;易于自动化。 定性能力较差。 A.J. P. MARTIN 和R.L.M. Synge 色谱法的发展历史 Developing history 色谱法的诺贝尔奖研究工作 Nobel prizes 微观分离过程Microcosmic separation process 色谱法分类 Classification (1) 按两相状态 According to states of two phases A. 气相色谱(GC): 气体为流动相 根据固定相是固体吸附剂还是固定液又可分为气固色谱(GSC)和气液色谱(GLC) B. 液相色谱(LC): 液体为流动相 分为液固色谱(LSC)和液液色谱(LLC) C. 超临界流体色谱(SFC): 超临界流体为流动相 随着色谱的发展,通过化学反应将固定液键合到载体表面,这种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱(CBPC)。 (2) 按分离机理分类 According to separation mechanisms 吸附色谱法:Adsorption chromatography 组分在固定相上的吸附能力强弱不同而分离的方法。 分配色谱法:Partition chromatography 组分在固定液(固定相)中溶解度不同而分离的方法。 离子交换色谱法:Ion exchange chromatography 组分在固定相上的亲和力不同而分离的方法。 凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法: Gel chromatography or Size exclusion chromatography 大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而分离的方法。 亲和色谱法:Affinity chromatography 不同组分与固定相的高专属性亲和力进行分离的技术,常用于蛋白质的分离 。 (3) 按固定相的外形分类 According to shapes of stationary phases 固定相装于柱内的色谱法,称为柱色谱。固定相呈平板状的色谱法,称为平板色谱,它又可分为薄层色谱和纸色谱。 根据以上所述,将色谱法的分类总结于下表中。 2 色谱流出曲线及有关术语 Effusion curve and relate items 如果进样量很小,浓度很低,在吸附等温线的线性范围内,色谱峰如果对称,可用Gauss正态分布函数表示: 式中:C—不同时间t时某物质的浓度,C0—进样浓度,tr—保留时间,σ—标准偏差。 (2) 基线 Base line 是柱中仅有流动相通过时,检测器响应讯号的记录值,即图中O—t线.稳定的基线应该是一条水平直线. (4) 保留值 Retention value A.死时间tM Dead time 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时,从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间,如图中 O′A′。因为这种物质不被固定相吸附或溶解,故其流动速度将与流动相的流动速度相近.测定流动相平均线速ū时,可用柱长L与tM的比值计算。
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