新型微生态制剂宫康素试验总结报告.docVIP

新型微生态制剂——宫康素试验总结报告 主持人 黄引贤 （华南农业大学兽医学院 广州 天河 五山 510642） 摘 要 宫康素是根据微生态学的基本理论,利用微生态工程的方法，以健康、高产母畜生殖道中有益无害的菌株研制出的一种新型微生态制剂。目前国内、外尚未见同类产品面市。历经6年时间的试验，已试制60批次，总量在150万毫升以上，经室内60次的安全试验，注射小白鼠600多只，以及现场10多万头次母猪、300多头奶牛的实际应用，结果均未出现不良反应；同时对预防母畜产后感染和治疗母畜生殖道炎症、流产、不孕症、产死胎、木乃尹胎、弱仔等，都收到了明显的效果。因此，宫康素对预防、治疗母畜繁殖障碍疾病，提高生产性能，促进养殖业的持续发展，都起了良好作用。此外，还对宫康素的安全性能、作用机理、防治效果以及与其它抗菌药物和性腺激药物比较等问题进行了讨论。 1. 前言 母畜由于生殖道受到感染而引起的繁殖障碍疾病，重点包括子宫炎、阴道炎、不发情、不受孕、流产、死胎、木乃伊胎、产仔特少以及产下弱仔等等，这类疾病无论在国内还是国外都普遍存在，而其发生原因又极为复杂，因此造成的经济损失十分严重。过去，对生殖道感染的防治方法主要依靠抗菌药物，采用全身疗法，或感染部位冲洗后再输入药物；这种传统疗法，虽然在历史上起到过良好作用，但是由于用药不规范，甚至滥用、乱用以及长期使用药物，除了直接引起严重的不良反应外，还会造成耐药菌株的产生。其次，近来来，亦有应用性激素来防治“不洁猪”、子宫炎和乳房炎等等，亦有一定效果，但激素类药物如果使用不合理，有可能会干扰机体正常的内分泌功能，而且其抑菌作用也不大。据此，我们根据微生态学的基本理论，利用微生态工程的方法，努力去探讨一种微生态制剂，并定名为“宫康素”，用来防治母畜的生殖道感染，提高其生产性能，以促进养殖业的健康持续发展。 回顾宫康素的研究过程，在历次的全国动物微生态学分会学术研讨会上，都得到了专家、教授们的热情鼓励和帮助，从而使得这一繁杂的试验工作，终于获得了初步的结果，现特提出总结报告，请予鉴定。 2. 试验经过与结果 2.1 菌种来源及其特性研究 2.1.1 菌种分离与鉴定 1995-1998年间，作者先后从广州、深圳两地区种猪场约30多头健康、高产母猪的子宫阴道分泌物及少数子宫粘膜处，分离获得了一大批正常而无毒力的各种类菌群，经初步鉴定和精心筛选，最后选定2株，即1号和4号，并已经中国科学院微生物研究所鉴定。 2.1.2 菌种的毒力测定 将上述2株菌种，通过皮下、肌肉、腹腔、静脉和子宫内等方法途径，接种于猪、兔及各种年龄的小白鼠（包括2天龄乳鼠和怀孕母鼠），结果所有试验动物均未见不良反应，孕鼠未发现流产，注射部位不产生炎症变化，将子宫粘膜经组织切片镜检亦未见异常，更没有引起动物死亡的情况，甚至在小白鼠体内连续传代6次，亦未发现任何毒性。其次，将这些菌种与猪或牛的精子混合，结果试验组精子比对照组精子的活力明显增强，寿命也延长。 2.1.3 菌种的抑菌试验 为了测定这2株菌种对猪、牛生殖道有致病作用的常见菌株有否拮抗（抑制）作用，设计了体外抑菌试验（主要为液体培养法）。具体方法是：将这2株菌种与等量各株致病菌，包括埃希氏大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏杆菌、克雷伯氏菌、嗜水气单胞菌、变形杆菌及绿脓杆菌等同时混合培养，或加大致病菌用量后混合培养，或将菌种先培养一定时间（24、48和72小时）后，再将两者等量同时培养，无论哪种方式，所有致病菌均在24小时后被完全抑制，而2株菌种依然生长得很好，这项试验均重复2-4次，结果一致。 2.1.4 菌种的稳定性 首先将菌种接种于半固体琼脂，4℃冰箱保存，1号菌经过788天、865天，4号菌经过418天和470天后，2株菌种仍然存活；而1号菌株则在普通肉汤中于4℃冰箱条件下，经过947天，甚至1023天，仍然生长很好，看来还能继续存活下去。其次，又将1号菌种初代次与连续传代的高代次（最低也在100代以上），进行比较，无论在菌体形态、培养特性、生化反应、PH变化以及抑菌作用等方面都未发现明显差异。此外，还将1号和4号两株菌种混合培养后，连续传代100代以上，结果仍然与原来的2株出发菌株的特性基本一致。 2.2 宫康素的制造 2.2.1 培养基的配制 我们将鲜牛肉汤、牛肉、旦白胨、各种糖类、酶制剂……等多种主要成份，配成不同的培养基，以比较其生长速度、菌数浓度等，结果，从中找到了一种细菌生长快、菌数多的培养基配方（G1号配方），该配方原料来源广，非常适合于大量生产用途。 2.2.2 菌种复壮 将保存的菌种至少复壮1代以上，待纯菌检查合格后，作为制苗菌种。 2.2.3 种子培养 将检验合格的菌种，按5%的比例作为种子培养液进行接种。 2.2.4 活菌增