核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择(精选).docVIP

核受体免疫组织化学染色时抗原修复方法的选择 来源：233网校论文中心[ 2011-01-06 10:26:00 ]阅读：10编辑：studa20 ???????????????作者：张富军，任娟，王飞苗，吕社民，李冬民??? 【摘要】? 　　目的 探讨不同抗原修复法对DA.1U大鼠肝组织内核受体检测结果的影响。方法 应用微波修复法、高压修复法、酶修复法和高压加酶修复法对DA.1U大鼠肝组织切片进行修复，然后进行免疫组化染色。结果 DA.1U大鼠肝组织内核受体LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR经高压抗原修复后，染色阳性强度较其他修复方法明显增强，而且定位较佳。结论 在核受体免疫组化染色中高压抗原修复法染色效果优于其他抗原修复法。 【关键词】? 核受体；免疫组织化学；抗原修复ABSTRACT: Objective? To explore the effects of different methods of antigen retrieval on the results of immunohistochemical staining of nuclear receptors. Methods? Antigens were retrieved by using microwave oven, autoclave, enzyme and autoclave plus enzyme, respectively, in liver sections from DA.1U rats, followed by immunohistochemical staining. Results? After antigen retrieval with autoclave, the positive staining intensity of nuclear receptors LXRα, LXRβ, PPARγ and FXR in the liver sections from DA.1U rats was enhanced obviously, and the location of nuclear receptors was better by using this method than the others. Conclusion? In the immunohistochemical staining of nuclear receptors, using autoclave to retrieve antigens is the best method. 　　KEY WORDS: nuclear receptor; immunohistochemical staining; antigen retrieval 　　核受体在生物体内广泛分布，与配体结合后活化，调控基因的表达，在机体生长发育、新陈代谢等生理过程中发挥重要作用。核受体LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR在糖、脂代谢调控中起重要的作用，参与2型糖尿病的发生发展。 ??? 免疫组织化学染色是根据抗原与抗体特异性结合的原理，用标记的特异抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量研究。甲醛溶液固定导致许多抗原决定簇被掩盖，不能与抗体很好结合。核受体位于核内，镜下观察染色结果时，若隐若现，抗原表达不均匀。为了解决该问题，使抗原决定簇能很好的暴露出来，我们采取了微波修复法、高压热修复法和酶修复法等。抗原修复方法对DA.1U大鼠肝组织切片进行修复；比较分析不同抗原修复法对DA.1U大鼠肝组织内核受体免疫组化染色结果的影响。 　　1? 材料与方法 　　1.1? 仪器与试剂? 　　Olympus DP71图像分析仪。LXRα、LXRβ、PPARγ和FXR抗体购自Abcam公司；免疫组化(SP法)试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.2? 组织材料??　　病理切片来自DA.1U大鼠糖尿病模型肝组织，经40g/L多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，5μm厚，每个蜡块各切5片。 　　1.3? 抗原修复? 　　组织切片常规脱蜡至水，3%(体积分数)H2O2灭活内源性过氧化物酶，0.02mol/L PBS冲洗后抗原修复。 　　1.3.1? 微波修复法? 　　将切片插入塑料切片架，放置于盛有150mL 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)的容器中，置微波炉内加热1min 40s，使缓冲液温度保持于82℃以上。取出切片架，室温放置3min，然后将切片架置于凉水中冷却15min。 　　1.3.2? 高压修复法? 　　将切片插入金属架，放置于盛有400mL 0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)的烧杯中，将烧杯放入高压锅内，盖锅、压阀。待煮沸喷气