第五章-荧光分析法-scf.pptVIP

处于基态的分子吸收能量后，跃迁到激发态，当激发态分子以发射光的形式释放能量，返回基态的过程，称为分子发光。 二、分子发光的分类(按激发的模式 ) （1）振动弛豫 当两个电子激发态之间的能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射方式转移至低能级的过程。 如右图，处于高激发态（S2）的电子，通过内转换，转移到低激发态（S1）的振动能级。 激发分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用而失去能量，并以热能的形式释放能量的过程。外转换使荧光或磷光强度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程。 如图，电子S1的振动能级同T1的振动能级重叠，则可能发生体系间跨越S1→T1 ，分子由激发单重态跨越到激发三重态，荧光强度减弱甚至熄灭。 物质分子吸收能量被激发后，从激发单重态的最低振动能级返回基态时发射出的光，称为荧光。 注意：无论电子开始被激发至哪一个激发单重态，经过振动弛豫及内转换，均可回到第一激发单重态的最低振动能级，然后再以辐射形式发射光而返回至基态各振动能级上。 荧光的产生在10-7-10-9s内完成。 电子由第一激发单重态的最低振动能级，以系间窜跃方式转至第一激发三重态，再经三重态最低振动能级返回至基态时发射的光，称为磷光。 由于（T1→S0）这个跃迁过程也是自旋禁阻的，其发光速率较慢，约为10-4-10s。因此，这种跃迁所发射的光，在光照停止后，仍可持续一段时间。 三、影响荧光强度的外部因素 1、温度 2、溶剂：极性、粘度 3、酸度：荧光物质自身最适宜的pH范围 4、荧光熄灭剂：主要四种类型 5、散射光：瑞利光、拉曼光 第三节 荧光分光光度计 用于测量荧光的仪器由激发光源、样品池、用于选择激发光波长和荧光波长的单色器以及检测器四部分组成。 由光源发射的光经第一单色器得到所需的激发光波长，通过样品池后，一部分光能被荧光物质所吸收，荧光物质被激发后，发射荧光。 紫外-可见分光光度计测量池(吸收池) 五、影响荧光强度的外部因素 温度降低，荧光效率和荧光强度升高。 1）温度 2）溶剂 随着溶剂的极性的增加，荧光物质的π→π* 跃迁几率增加，荧光强度将增强，荧光波长也发生红移；溶剂粘度降低，荧光强度降低；溶剂应达到足够的纯度。 3）pH值 具酸或碱性基团的荧光物质，在不同pH值时，其结构可能发生变化，因而荧光强度将发生改变。荧光物质都自身最适宜的pH范围。 NH3+ OH- H+ NH2 NH- OH- H+ 荧光淬灭（荧光熄灭）：荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光淬灭。 荧光淬灭剂：能引起荧光熄灭的物质。 4)荧光淬灭 碰撞淬灭 M+hv→M*,M*+Q → M+热 静态淬灭 M+Q → MQ 非荧光物质 转入三重态的淬灭 三重态，氧的作用 荧光物质的自淬灭 荧光物质浓度较高 导致荧光淬灭的四种原因： 荧光淬灭法: 荧光物质加入某种淬灭剂后，其荧 光强度的减少与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系，可用于测定熄灭剂的含量，这种方法称为荧光淬灭法。 5)散射光 瑞利散射光(Rayleigh scattering light)：光子与物质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换，运动方向改变；λ瑞利光＝λ入射光 拉曼散射光(Raman scattering light) ：光子与物质分子发生非弹性碰撞，发生能量交换，运动方向改变；λ拉曼光≠λ入射光 消除方法：选择适当的激发波长 320 360 448 激发 320nm 硫酸奎宁 350 448 激发 350nm 硫酸奎宁 320 360 激发 320nm 0.1mol/L硫酸 350 400 激发 350nm 0.1mol/L硫酸 a.强度 b.强度 硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光（a）与拉曼光谱（b） 2、定量方法 1、定量依据 第二节 荧光定量分析方法 优点 1.灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级； 检测下限：0.1～0.001?g/mL 2.选择性强 既可依据发射光谱特征，又可根据激发光谱特征； 3.试样量少和方法简单 缺点 应用范围小 1、定量依据 荧光强度 If 正比于吸收的光强度 Ia 和荧光量子产率Φ ： 由朗伯-比耳定律得： 荧光强度 If ： 对于稀溶液，当 2.303?bC 0.05时： If ----荧光强度 I0 ----入射光强度 Φf ----荧光量