生物技术专题--基因分离与功能鉴定解决方案.pptVIP

生物技术专题之基因分离及功能验证的方法 主讲人：郭志富 生物技术教研室 2011年9月7日 培养思维 巧于借鉴 真打实干 郭 志 富 生物科学技术学院 三、刊物的选择 搜集并储存相关刊物信息借助网络、论坛及其强大的搜索功能。 如在google中输入植物 SCI论文 投稿等字样 * * 什么是基因？ 为什么要研究基因？ 如何研究？ 原核体外表达 真核过表达 定量表达 常用方法 位置—分类--结构—功能 蛋白质功能体外鉴定 转基因应用 表达规律 前 言 植物基因分离克隆的方法 同源克隆： 已知基因序列比对保守区简并引物设计未知物种中分离 RACE获得全长结构解析表达分析功能比较与验证等 优点：简单，短平快 局限：过于简单，技术含量低，非新基因，文章水平相对较低 后续试验内容需增加 蛋白差异分析： 性状差异双向电泳蛋白点分离氨基酸组成分析序列端部分析DNA信息 差异蛋白点过多，测序片段随机且过短，氨基酸→碱基序列简并性过高 高通量基因芯片（诺丁汉大学—陆春贵博士）： 差异性状基于已知序列高通量表达差异分析确定大量关联基因新基因价格昂贵数据分析处理复杂 消减抑制杂交（SSH） 性状差异个体（或不同处理）cDNA酶切分别加接头与对照两轮杂交扩增 假阳性较多随机 图位克隆 群体至关重要工作量超大获得基因随机仍是王道 寻找性状差异 性状分离 不分离 软件分析初步定位 回交-扩大群体 图位克隆策略 杂交-F1 选择父母本 差异显著（最好其他性状差异较小） 自交 或突变体 单粒传 构建群体 表型统计 分子标记 SSR等 近等基因系 精细定位 1-5cM甚至更小 基因组文库 探针筛选 目标基因连锁的分子标记 叠连克隆群 染色体步移 外显子的分离、鉴定 功能互补实验 确定基因 转基因过表达、基因敲除 研究背景及意义 气孔性状气孔密度、气孔长度和气孔开度水分、气体交换和光合作用与生长发育及产量相关 通过叶片较厚、气孔密度较小的粳稻和叶片较薄、气孔密度较大的籼稻杂交并进行多次回交或复交，可能是改进叶片质量的有效途径之一。 气孔性状QTL图位克隆实例 具体方案 秋光 七占山 重组自交系 （RILs） × F1 。。。 F9 （200株系） F10 气孔性状调查 （200株系）QTL初定位--SSR 精细定位群体（5000株以上） SSR精细定位（1-5cM甚至更小） 搜索水稻基因组数据 建库—钓基因 功能验证 1.在父母本之间筛选差异引物 （每条染色体10对以上，12*10=120对） 2.每对引物上F10群体（120*200=24000） 具体操作 3. A电泳检测 4.与父母本带型比较分析数据 理论上：各株系最多可能出现三种带型：父本， 母本及杂合。 每周一次，坚持的较好 进展汇报 近两年的文献总结，制作PPT交流 互动讨论气氛好 2.1 Seminar的形式 第二部分：见闻及感触 2.2 教学形式 讨论式教学，学生都要做“发表” 弱化应试型考试，以主观题为主 每个研究室只配一名教授，且权力较大，去 行政化程度较好 研究氛围良好，实验室24小时开放 2.3 研究机构设置及管理 2.4 其他 不注重门脸 社会、文化及景点请踩QQ空间日志 京都大学正门 京大物理、化学和农学校区正门 东京大学红门 东京大学 大阪大学 神户大学 2010年7月23日 青年教师科研工作体会与交流 科研工作的开展与持续 英文文章的撰写 刊物的选择 提 纲 一、科研工作的开展与持续 “寄人篱下、白手起家” 选定合作人后： 积极主动、肯干，真正动手做！ 用手不用嘴用嘴不用手 不计较慷慨（用人家的东西） 付出终有回报 坚持反复调整 一穷二白怎么办 多读文献 Idea来源于文献，来源于借鉴和变通 （重中之重） 中文文章 硕博论文 英文文章 30% 70% 借鉴思维和方法 多交流闭门造车可能会走很多弯路 多问,多思考,多讨论 听相关报告 网络论坛交流 材料为王时刻留意特殊材料 羊肚菌 东北连翘 虽然四级没过，但博士毕业时写了10多篇SCI论文，IF20 英语应用和应试是两码事 二、英文文章的撰写 敢写培养思维和信心王际睿 多读文献学会借鉴（英语为母语的文章）精读选读 标记常用语句和句型，可在旁边注释能应用在前言、方 法还是讨论里。 勿汉译英 中文意思寻找英文相应句子或句型 ，稍作变通