浅议植物细胞凋亡(精选).docVIP

浅议植物细胞凋亡 姓名：刘文娜 班级：财管1013班 学号摘要: 细胞凋亡是多细胞生物体在生理或病理条件下部分细胞所采取的一种由内在基因编程调节,通过主动的生化过程而自杀死亡的方式⑴。?由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控，所以常常又称为细胞编程性死亡，是植物正常发育中必不可少的一部分。本文对植物凋亡的一般特征、植物营养和生殖生长中的细胞凋亡以及植物-病原物互作中的 细胞凋亡进行了综合评述,并对植物细胞凋亡研究的现实意义进行了探讨。 关键词:?植物 细胞凋亡 研究展望 引言??细胞凋亡的现象最早是Kree在1965年观察到的，经过进一步深入研究，他于1972年将其重新命名为细胞凋亡。之后近20年，细胞凋亡的研究主要集中在动物，人们越来越认识到细胞调亡在维持动物体内细胞和组织平衡、特化、形态建成和防病、抗病过程中的重要作用。但由于植物生长发育和细胞结构的特殊性，有关植物细胞凋亡的研究起步较晚。近年来，随着植物细胞凋亡的研究进展，人们逐渐认识到细胞凋亡是高等植物生长发育的必要组成部分，同时也是植物体度过不良环境的重要手段。目前,植物细胞凋亡的研究已成为近年来植物细胞生物学的新兴研究领域和热点之一。本文就植物细胞凋亡的一般特征、检测方法、在植物中的存在及意义作一综合阐述。 1 植物细胞凋亡的一般特征 经历细胞凋亡过程的细胞呈现一些典型的形态学变化,光学显微镜或电子显微镜观察可见:细胞体积缩小,染色质凝集、断裂、趋边化,细胞器解体、消失,细胞膜发泡形成凋亡小体。随着研究的深入,分子生物学证据也逐步被阐明:细胞染色质DNA?在核小体连接部位断裂,其片段大小为200bp的倍数,经琼脂糖凝胶电泳可见到特征性的DNA?梯度?,此特征还可以通过超速离心、末端标记电泳以及原位缺口翻译技术等进行定性、定量测定。细胞形态学和分子生物学的变化是细胞凋亡的重要诊断依据。 2 细胞凋亡的检测方法 2.?1 细胞形态学观察法 (1)电子显微镜。电镜观察,凋亡细胞染色质固缩,常聚集于核膜上呈境界分明的块状或新月形小体,?初期细胞可见完整的细胞器,?细胞膜完整,?凋亡小体形成。目前一致认为,?电镜下获得凋亡细胞特征性的形态学改变是判断细胞凋亡的最可靠依据。 (2)?荧光显微镜。对体外培养的活细胞经荧光色素处理,?可在荧光显微镜下观察细胞形态改变。常用荧光色素有吖啶橙、Hoech?st?33258或Hoech?st?33342、碘化丙啶(P?I)、溴乙锭(EB)。前两种可分别进入活细胞和死细胞,?而后两种荧光素仅能进入死细胞。不同的荧光素使核着染不同颜色的荧光,?正常细胞呈均匀荧光染色,?而凋亡细胞呈致密浓染的颗粒状或块状荧光。 2.?2 反映凋亡细胞膜改变的方法：染料排斥法。 除了电镜能反映细胞膜完整性外,?还可用染料排斥法,?如台盼蓝、P?I?等。坏死细胞膜破损,?被染料着染。而凋亡细胞细胞膜完整,?不被着染。但在体外培养的细胞最终也会发生继发性坏死。因此,?此法不能单独用来判断凋亡细胞。另一种方法是判断胞质膜的不对称性。在正常细胞膜上,?磷脂酰丝氨酸基团(PS)?位于胞内侧,?而在细胞凋亡早期膜上此基团则转向胞外侧,?以利于被吞噬。因此,?磷脂酰丝氨酸基团位置的改变,?可作为凋亡细胞的一个标志。 2.?3 反映脱氧核糖核酸有规律断裂的方法 (1)?琼脂糖凝胶电泳法。细胞悬液经裂解消化按常规法提取DNA后,?于含EB?的琼脂糖凝胶中进行电泳,正常细胞DNA呈单一条带。细胞凋亡时呈典型的梯状条带,系180～?200?bp?左右的及多聚核小体的梯状DNA条带。坏死时则呈现模糊的弥散状条带。DNA电泳法是判断细胞凋亡的经典方法.?PEG6000?诱导的小麦叶片?、羟自由基诱导的烟草细胞、细胞色素c诱导的胡萝卜和烟草原生质体?和乙烯诱导的胡萝卜原生质体发生PCD?时均检测到DNA?梯状条带。 () 原位末端标记法。通过DNA?多聚酶I?把已标记的核苷酸结合到DNA?的单链断裂处,?以寻找有无Ap?发生。标记的方法有同位素标记、荧光素标记、地高辛或生物素标记等。 ()?原位切口平移法。利用DNA?多聚酶将核苷酸整合到Ap?细胞内断裂的DNA?3′羟基末端,?同时水解5′末端,以修复DNA。若用已标记的核苷酸,?即可显示出有断裂DNA?的细胞。该法同样也可用于细胞悬液中Ap?的观察。? ()?EL?ISA?法。对Ap?细胞内DNA?片段的检测还可用EL?ISA?法。悬浮细胞经裂解,?高速离心去除核的成分后,?取上清加入已包被有抗组蛋白抗体的反应板,?反应后再加酶标抗DNA?抗体,?若上清中含断裂的DNA片段,?则可通过此双抗体夹心法得以检出。 3 植物发育过程中的细胞凋亡 萌发的种子中的糊粉层、维管束的木质部、生殖