三角褐指藻5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达.docVIP

三角褐指藻?5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达 杨哲, 魏东盛, 邢来君, 李明春 南开大学微生物学系 分子微生物学与技术教育部重点实验室, 天津 300071 摘 要: ?5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的? 5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物, 分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520 bp和1410 bp的特异片段, 序列分析结果显示, 结构基因中含有一个大小为110 bp的内含子, 这是国内外首次报道。将?5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0中, 在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pYPTD5, 用电击转化的方法将重组质粒pYPTD5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中, 在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YPTD5。在合适的培养条件下, 添加外源底物双高?-亚麻酸和诱导物半乳糖, 培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析, 表明三角褐指藻?5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达, 将双高?-亚麻酸转化为花生四烯酸, 其底物转化率达到了45.9%。 关键词: 花生四烯酸, 酿酒酵母, 功能验证 Cloning and expression i