基因工程制药论述.ppt

Contents of chapter 3 2、菌体生长速率对质粒拷贝数和质粒稳定性的影响：高生长速率时质粒拷贝数下降，但稳定性增加。 三、质粒稳定性的分析方法 样品 （2）细胞破碎技术 工程菌高效表达的产物大部分在胞浆内； 细胞壁以肽聚糖为骨架，由乙酰葡萄胺和乙酰胞壁酸交替排列，形成有一定韧性的网状结构。 机械破碎方法 超声波法 在15—25千赫(kHz)的频率下操作； 操作时易引起温度上升，需要对细胞悬液做冷却处理； 大规模操作，因需要输入很高能量，提供必要的冷却而难于实用； 适用于破碎少量细胞，尤其是破碎包涵体表达的细胞。 高压匀浆法： 细胞悬液在高压匀浆器中受瞬间失压和高速流动形成的剪切、碰撞的作用，使细胞壁破裂； 大规模破碎细胞的常用方法。 高速珠磨法： 细胞悬液和助磨剂在高速珠磨机中被快速搅拌研磨，经剪切、碰撞，促使细胞壁破裂； 大规模破碎细胞的常用方法。 非机械破碎方法 酶解法：常用溶菌酶等破坏细胞壁 酶价格昂贵 、纯化过程中需除尽； 不适于大规模生产。 渗透压冲击法 适于细胞壁较脆弱或用酶预处理的菌体； 适用于分离周质空间分泌表达的基因工程产物。 反复冻融法 破碎率低； 引起对冻融敏感的蛋白质变性。 化学裂解法 用有机溶剂（苯、甲苯）和表面活性剂(SDS等)、抗生素、变性剂等改变细胞壁或细胞膜的通透性； 应防止目的产物变性。 选择合