银杏叶中黄酮的提取分离及测定1.ppt

银杏叶中黄酮的提取分离及测定 应化1202 罗江伟 付 振 徐 璐 李依霖 姚舒凡 一、实验目的 1）掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取。 2）掌握紫外分光光度计的应用，以及origin软件绘图的基本操作 。 3）学会自主设计实验，培养团队合作精神。 二、实验原理 提取银杏中黄酮类化合物的主要方法有：水蒸气法、有机溶剂萃取和超临界萃取法。常用的有机溶剂有：甲醇、乙醇、丙酮、石油醚等。干燥和粉碎过的银杏通过索氏提取后，蒸去溶剂可得到棕黑色的银杏浸膏粗提物。粗提物经过萃取、沉淀法或柱分离精制后，得到精提取物，为黄褐色的粉末，其中黄酮类化合物含量在 20%--26%。 三、化学药品及仪器 1、化学药品 乙醇（20%、60%、70%） 二氯甲烷 无水硫酸钠 氢氧化钠溶液（0.5mol/L） 盐酸溶液（0.5mol/L） 银杏叶粉末 三、化学药品及仪器 2、仪器 索氏提取器 滤纸 100ml量筒 10ml量筒 圆底烧瓶（500ml）三口烧瓶 温度计 球形冷凝管 铁架台 分液漏斗（500ml） 锥形瓶（100ml、250ml） 50ml容量瓶 150ml小烧杯6个 移液管0.5ml，1ml，2ml 水浴锅 旋转蒸发器 紫外分光光度计 四、实验步骤 1、粗提物： 称取干燥和粉碎的银杏叶粉末50克，装入索氏提取器的滤纸套袋中，在500ml圆底烧瓶内加入250ml60%乙醇，用65-80℃水浴加热。连续提取3h左右，等叶子颜色变浅可停止加热。待在虹吸管内冷凝液刚落下时，立即停止加热，改成旋转蒸发器，减压蒸去溶剂即得棕黑色的银杏浸膏粗提物。称重，计算产量。 四、实验步骤 2、分离： 液-液萃取法： 在500mL烧杯中，将银杏浸膏粗产物加250mL去离子水，搅拌均匀，再将此溶液转移至分液漏斗中，用60mL二氯甲烷萃取三次，取下层液，合并萃取液。用无水NaSO4干燥。用旋转蒸发器蒸去二氯甲烷，蒸馏剩余物为黄酮提取物。经干燥后称重，计算产率。 四、实验步骤 3、测定： (1)标准曲线的绘制： 精确称取芦丁标准样品50.0mg，置于50mL烧杯中，加少量70%乙醇使之完全溶解，转入50mL容量瓶中，再用70%乙醇定容至刻度，摇匀，得1.0mg/mL的芦丁标准溶液，再分别吸取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL芦丁标准溶液置于50mL容量瓶中，按照下述方法配置显色溶液；各加70%乙醇使成25mL，然后分别加入5%NaNO2溶液1.5mL，摇匀，放置6min后，再加10%Al（NO3）3溶液1.5mL,摇匀，放置6min后，加NaOH溶液20mL,最后用蒸馏水稀释至刻度（50mL），摇匀，放置15min后，以不加芦丁的试剂为空白，用紫外光分光光度计测定510.0nm处的吸光度。以浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。 四、实验步骤 (2)总黄酮含量的测定： 准确量取2.0mL黄酮液与50mL容量瓶中，按照绘制曲线的显色方法配置显色溶液，用紫外可见分光光度计测定510.0nm处的吸光度，利用曲线回归方程计算粗黄酮液中总黄酮的含量和原料总黄酮的得率。 * *