第十章色谱分析法导论1.pptxVIP

色谱分析法导论 概论 色谱分析法的起源 1906年 俄国植物学家Tswett创立色谱法 石油醚(流动相) } 色 谱 带 碳酸钙(固定相) 色谱分析法 是利用混合物不同组分在固定相和流动相中分配系数(或吸附系数、渗透性等)的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进行反复分配，组分分配微小差异导致迁移速率差异，从而实现分离的分析方法 分离通常通过物理方法实现，目标是实现混合物组分迁移并在空间上重新分布，从而完成分离、富集和纯化 （a+b+c+d） →(a)+ (b)+ (c)+ (d) 色谱法分类 色谱分析法的特点和应用 分离效能高 灵敏度高，可检测10-11~10-13g,适于痕量分析.色谱分析需试样量极少(?g或ng) 分析速度快 应用范围广 缺点：对未知物的定性分析比较困难 方向：高选择性检测器；联用技术（ GC-MS、GC-FTIR、LC-MS、LC-NMR等） 色谱基本概念 色谱分析基本原理 分布常数大的组分迁移速度慢 t1 t2 t4 t3 色谱图 基线：反映检测器噪声随时间变化的曲线 峰高（h）：色谱峰顶点与基线之间的垂直距离 区域宽度：反映色谱柱效能 标准偏差? 即0.607倍峰高处色谱峰宽的一半 半峰宽W1/2 W1/2=2.354? 峰底宽度Wb Wb = 4 ? 保留值：描述待测试样中各组分在色谱柱中滞留情况的物理量 保留值 保留时间(tR) 死时间(tM) 调整保留时间(t’R) 保留体积(VR) 死体积(VM) 调整保留体积(V’R) 相对保留值(r2,1) 保留指数(Ix) → → → 色谱图可提供信息 色谱峰的个数：可以判断样品中所含组分的最少个数 色谱峰的保留值，可以进行定性分析 色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析 色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据 分配系数（平衡常数） 在一定温度和压力下，组分在两相间达到分配平衡时，组分在固定相中的浓度cs与组分在流动相中的浓度cm之比 K：与温度、压力、组分性质、固定相和流动相性质有关 不同组分K值的差异，是实现色谱分离的先决条件 容量因子（分配比） 在一定温度、压力下，组分在两相中达到分配平衡时的质量比 分配比与分配系数关系： 相比 k与温度、压力有关外，还与组分性质、固定相和流动相性质及 ? 有关 色谱理论基础 塔板理论 速率理论 塔板理论 将色谱分离过程比拟作蒸馏过程，将连续的色谱分离过程分割成多次的平衡过程的重复 假设： 色谱柱内径一致、填充均匀，由若干个高度为H的塔板组成 溶质在每个塔板上的分配系数不变，在两相间瞬间达到分布平衡，纵向分子扩散忽略 流动相流经色谱柱是脉冲式的间歇过程，每次进入和从上一个塔板向下一个塔板转移的流动相体积相等 塔板理论结论 理论塔板数越多，柱效率越高 样品进入色谱柱后，只要各组分在两相间的分配系数有微小差异，经过反复多次的分配平衡后，仍可获得良好的分离 n 与半峰宽及峰底宽的关系式： tR 一定时，色谱峰越窄，n越大，H越小，柱效能越高 有效理论塔板数： 塔板理论的特点 用热力学的观点阐明了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程 解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置 提出了计算和评价柱效的参数 不能解释造成谱带扩张的原因和影响板高的各种因素 不能说明同一溶质为什么在不同的流速下，可以测得不同的理论塔板数 速率理论 1956年荷兰学者van Deemter（范第姆特）等在研究气液色谱时，提出了色谱过程动力学理论——速率理论。他们吸收了塔板理论中板高的概念，并充分考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而在动力学基础上较好地解释了影响板高的各种因素 速率理论公式 ū为流动相的平均线速度，单位：cm/s； A、B、C、为常数，分别代表涡流扩散系数、分子扩散项系数、 传质阻力项系数 涡流扩散项（A） 由于流动相携带溶质分子沿柱内各路径形成紊乱的涡流运动引起 dp：固定相的平均颗粒直径 λ：固定相的填充不均匀因子 固定相颗粒越小dp↓，填充的越均匀，A↓，H↓，柱效n↑。表现在涡流扩散所引起的色谱峰变宽现象减轻，色谱峰较窄 纵向扩散项B/u（分子扩散项） 当组分进入色谱柱后，由于在柱中沿流动相方向存在浓度梯度，从而引起的色谱峰变宽 γ弯曲因子，填充柱色谱， γ 1 Dm：试样组分分子在气相中的扩散系数（cm2·s-1）。与组分性质、载气性质、柱温、柱压等因素有关 传质阻力项 Cū 物质系统由于浓度不均匀而发生的物质迁移过程，称为传质 流动相传质阻力 固定相传质阻力 载气流速对理论塔板高度的影响 最低点 速率方程 组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩散、浓度梯度