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基于G1肽树枝状聚合物作为潜在的基因递送载体Bioreducible交联的聚合物 Chun-YanLi, Hai-JiaoWang, Jing-MingCao, JiZhang, , Xiao-QiYu,  摘要 原文阐述合成一系列基于低代（G1）肽树枝状阳离子聚合物与含有二硫键的联系。DNA结合的目标聚合物的能力，通过凝胶电泳和荧光猝灭测定研究。所述含二硫键的聚合物P2和P3的bioreducible属性还研究了在二硫苏糖醇的存在下醇（DTT）。结果由动态光散射（DLS）和透射电子显微镜（TEM）分析表明，这些物质可能会凝结成的DNA纳米颗粒与适当的尺寸和ζ电势。体外细胞实验表明，相对于支25千道尔顿的PEI，P2和P3可以表现出在两种染HEK293和U-2OS细胞高得多的基因转染效率和低的细胞毒性。另外，由Michael加成制备的聚合物具有更好的基因转染的能力，而从开环反应制得的聚合物具有较好的耐受性血清。结果表明，这些聚合物可能是其容易制备，非常低的细胞毒性，和良好的转染效率有前途的非病毒基因载体。 关键字 基因传递;Bioreducible聚合物;二硫化物;树枝状大分子;非病毒载体  1.简介 基因治疗已被广泛研究用于治疗重大传染病，癌症和遗传疾病[1]。虽然病毒已经在该领域被广泛使用，非病毒化学载体呈现出更为可行的选择，吸引越来越多的研究兴趣为他们的毒性小，无免疫原性，容易在制备，以及较大的基因的能力[2]和[3]。作为非病毒载体，阳离子脂质体和聚合物可以通过静电相互作用有效地凝结的质粒DNA，并通过内吞作用促进细胞摄取。最近，基于应用的非病毒基因递送系统的临床试验数量迅速增加[1]，[4]，[5]和[6]。在众多种生物相容的和有效的阳离子聚合物载体，树枝状聚合物已被证明是对他们的良好定义的三维分子结构的潜在选择，低多分散性，可控的分子大小和高度适应性的表面化学性质[7]，[8]，[9]和[10]。肽树枝状聚合物如树突聚（1-赖氨酸）衍生物已被报道用于基因递送。这些材料被证明具有良好的柔韧性，生物相容性和抗蛋白水解消化[9]，[11]，[12]，[13]，[14]和[15]。2结果与讨论2.1。交联聚合物的合成根据G1肽树枝状聚合物目标聚合物的合成击溃示于方案1中的联动化合物1-3，根据已报道的方法制备。化合物1无二硫键被用于在SAR研究比较。丙烯酸酯3（CBA）已经被证明是一种有效的起始原料通过Michael加成[25]，以产生希望的基因递送载体，[26]，[27]和[28]。目标聚合物直接从肽树枝状聚合物G1和联动的化合物合成。为二醇缩水甘油基醚1-2，聚合是通过环氧化物的通过氨基上G1中的攻击的开环反应来实现的。为P2的制备中，为了避免高的水平的交联，这可能会导致不溶性产物，联动化合物的量是有限的，和G1/2的摩尔比为1：0.5。反应温度​​也影响聚合，并且60℃被认为是适合的聚合产物用适当的分子量和溶解性。类似的反应条件，在P1和P3的制备中应用，所不同的是使用乙醇作为溶剂，在P1。对聚合物进行了最后转化为盐酸盐的形式，以确保它们的溶解度。三个目标聚合物的分子量（Mw）为与窄的多分散性（实验部分）类似。2.2。DNA结合的聚合物的能力图为琼脂糖凝胶电泳，由图可知第一次施加到调查朝向质粒DNA的聚合物的结合能力。的DNA会被延迟，在电泳时缩合反应。如图所示。1，在各种量的聚合物的存在下，DNA的逐渐延迟随着聚合物/DNA的重量比的增加（w/w的）。对于所有三种聚合物，完整DNA的相位差可在w/w的4。然而可以发现，如小分子，G1的不能凝结的DNA和延缓其上电泳。比较这两个二硫键含有聚合物P2和P3，我们发现，P2显示出较弱的DNA结合能力。这可能是由于由所形成的开环聚合反应中的羟基基团上的正电荷的屏蔽。聚合物P1是通过相同的方法制备的P2和P1的更好的DNA结合能力，可能是由于它的仲胺基团上的键。2.3。该多聚物的特性适当的粒径和多聚物的ζ电位是在基因转染显著，和大约200纳米的尺寸被发现是合适的[22]。从G1的交联的聚合物P1到P3和DNA所形成的多聚物的粒径进行测定，在w/w的比率，通过动态光散射（DLS）范围从0.5到20。图。图4（A）示出的P2/DNA和P3/DNA复合物得到纳米尺寸的颗粒具有200-300纳米的近似直径。而令人惊奇地，虽然P1具有较强的DNA结合能力，其形成多聚物具有较大的尺寸，这可能是不利的内吞作用的方法。对于Z-电位，导致图。图4（B）揭示了这些多聚物的那个ζ电势从负增长到正与w/w的比例的增加。电荷相反的结果发现，在重量/重量的〜2，其用于在凝胶上电泳几乎满的DNA相位差（图1）的值。从P1和P2形成的多聚物的低ζ电势可能是由于由开环聚合反应生成的羟基基团，导