头孢曲松钠减轻水通道蛋白4抗体对星形胶质细胞毒性作用.pdfVIP

中文摘要 头孢曲松钠减轻水通道蛋白4抗体对星形胶质细胞的毒性作用 摘 要 目的：视神经脊髓炎(Neuromyelitis optica，Nnvio)是一种中枢神经系 统自身免疫性炎性脱髓鞘性疾病，主要累及视神经和脊髓。自从发现NMO 患者血清中存在特异性抗体即水通道蛋白(Aquaporin一4，AQP4)抗体以 来，越来越多的证据表明其在NMO发病机制中发挥重要作用。AQP4抗 体和星形胶质细胞突触表面的AQP4结合能引起补体依赖性和抗体依赖 性细胞毒性作用导致星形胶质细胞的死亡、炎症细胞募集、细胞因子释放 和血脑屏障的破坏，产生NMO病理改变。近年研究提示谷氨酸转运体1 (glial glutamate transporter-1，GLT-1)和谷氨酸兴奋性毒性作用可能涉及 NM0发病机制，但结论不一。众所周知头孢曲松钠能上调星形胶质细胞的 GLT-1表达，故本研究使用体外原代培养的新生SD大鼠(Sprague．Dawley rats)大脑皮层神经细胞，观察头孢曲松钠对AQP4抗体阳性血清诱导的 星形胶质细胞毒性作用、GLT-1表达以及谷氨酸浓度的影响，探讨头孢曲 松钠是否能减轻AQP4抗体对星形胶质细胞的毒性作用。 方法：常规方法提取出生后24h之内的SD大鼠的大脑皮层。将皮层 神经细胞接种于直径为35mm培养皿中，培养液为含20％胎牛血清的 DMEM／F12，在37℃C02孵育箱中培养，分别在24h、72h、6d后更换培 养液。实验共分为4组：1．对照组：10％的比例加入健康人血清；2．AQP4 抗体阳性组：10％的比例加入AQP4抗体阳性NMO患者血清；3．头孢曲 松钠预处理组：给予AQP4抗体阳性血清干预前10uM浓度头孢曲松钠干 预48h；4．头孢曲松钠组：给予10uM浓度头孢曲松干预48h后正常培养 24h。细胞培养9d后进行免疫组织化学荧光染色。观察不同实验组星形胶 质细胞形态和数目的变化；同时使用比色法测定上清液谷氨酸浓度，使用 免疫印迹分析GLT-1表达水平。结果采用SPSSl6．0统计软件处理，所有 计量资料采用i±S表示，多组间单因素方差分析。P0．05认为差异有 统计学意义。 结果： 中文摘要 1 AQP4抗体及头孢曲松钠对原代培养的大鼠皮层星形胶质细胞形态 及数目的影响： 荧光显微镜下观察，对照组星形胶质细胞外形清晰，突起粗壮；AQP4 抗体阳性组星形胶质细胞胞体肿胀、突起断裂甚至消失，而头孢曲松钠预 处理组星形胶质细胞形态变化明显减轻。对照组、AQP4抗体阳性组和头 孢曲松钠预处理组星形胶质细胞数目分别为117．60±12．42个／视野、15．20 ±3．83个／视野和69．40+9．18个／视野，各组间比较差别均有统计学意义 (F值93．02 P均O．01)。而头孢曲松钠组并不引起星形胶质细胞形态 学变化，星形胶质细胞数目(112．80+15．29个／视野)与对照组相比差别 无统计学意义(PO．05)。 2 AQP4抗体及头孢曲松钠对原代培养的大鼠皮层细胞上清液中谷氨 酸浓度的影响： 使用比色法测定不同实验组细胞培养上清液中的谷氨酸浓度，研究发 现AQP4抗体阳性组谷氨酸浓度(1356．30___330．959M)较对照组(742．02 -1 36．049M)明显升高(_PO．01)；头孢曲松钠预处理组谷氨酸浓度 (676．89±176．909M)与AQP4抗体阳性组比较有明显下降(尸O。01)； 头孢曲松钠组谷氨酸浓度(740．76±174．63pM)与对照组及头孢曲松钠预 处理组比较差别均无统计学意义(P均O．05)。 3 AQP4抗体及头孢曲松钠对原代培养的大鼠皮层星形胶质细胞表面 GLT-1表达的影响： 使用免疫印迹法分析AQP4抗体以及头孢曲松钠预处理对GLT-1的 表达的影响。研究显示和对照组(O．69±O．16)比较，头孢曲松钠能明显 增加GLT-1表达(1．024_0．30，P0．01)；AQP4抗体阳性组GLT-1表达水 甲(O．524_0．15)较对照组明显减少(尸O．05)；头孢曲松钠预处理组GLT-1 表达水平(O．824_0．23)与AQP4抗体阳性组比较有明显上调(尸O．01)； 而头孢曲松钠预处理组与对照组比较差别无显著统计学意义(尸O．05)。 结论： 1头孢曲松钠能减轻AQP4抗体阳性血清对体外培养的大鼠脑皮层星 形胶质细胞的毒性作用。 2 AQP4抗体阳性血清能增加细胞外谷氨酸水平，头孢曲松钠可能通 过上调GLT-1的表达减少细胞外液谷氨酸水平。 中文摘要 英文摘要 Ceftriaxone attenuates the cytotoxic effect of anti--aquaporin-．4 antibody on astrocytes ABSTRACT