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细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 返回目录 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 学习膜蛋白的间接荧光免疫标记 学习荧光显微镜的使用 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 实验目的： 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 黏附分子中，整合素家族是一组细胞表面糖蛋白受体，目前已知的整合素有22种之多，均为由α和β亚单位通过非共价键联结而成的二聚体，根据分子中β亚单位的不同，将整合素分子分为8个亚家族，其中，β2亚家族也称白细胞整合素，它们共有CD18为β亚单位，且均局限在白细胞上表达。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 实验原理： 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 利用抗原－抗体的特异识别特性，CD18的抗体作为一抗可以特异地与白细胞表面的β2分子结合，再利用荧光标记的抗一抗种属源性的二抗就能间接地将白细胞进行特异性“染色”。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 实验原理： 间接免疫荧光技术工作原理 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 1．收集生长状态良好的悬浮细胞HL-60或Jurkat，2000 rpm离心5分钟，弃上清。 2．1ml PBS重悬(洗涤)，吹打,并调整浓度为4～6×106/ml个细胞。 2000 rpm离心5分钟，弃上清。 3．400ul重悬, 分装细胞悬液为两个200μl，分别等体积加入多聚甲醛固定液，室温固定10分钟。 4．3000 rpm离心5分钟，弃上清。 5．1ml PBS重悬细胞，洗涤残留的多聚甲醛，3000 rpm离心5分钟，弃上清。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 实验步骤： 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 6．100μl PBS 重悬细胞。 7．一份细胞悬液中加入1μl一抗（或加入1μl同型免疫球蛋白作为阴性对照），混匀。室温作用40～60分钟。 8． 1ml PBS重悬细胞，洗涤未结合的一抗分子，3000 rpm离心5分钟，弃上清。 9．重复上述步骤1次。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 实验步骤： 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 10．再次用200μl PBS 重悬细胞，实验组、对照组细胞悬液中分别加入1μl FITC标记的二抗，混匀。室温避光作用30分钟。 11．1ml PBS重悬细胞，洗涤未结合的二抗分子，3000 rpm离心5分钟，弃上清。 12．重复上述步骤1次。 13．50-100μl PBS 重悬细胞，取10～20μl细胞悬液滴于载玻片上，盖片后，正置荧光显微镜下观察，并比较实验组与对照组的差异。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 实验步骤： 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 比较实验组、对照组荧光标记差异，照相记录实验结果。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 作 业： 细胞表面黏附分子的荧光标记及观察 细胞生物学实验 东北师大 生科院 实验过程中使用一抗同型IgG分子作为阴性对照的意义。 实验目的 实验原理 实验步骤 作 业 思 考 思 考：