zly《实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》(浙科版选修1)1.pptVIP

第二部分:酶的应用 1、酶制剂的概念和种类 （一）酶制剂 含有酶的制品 ①定义： 多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶 ②种类： A、液体酶制剂 治疗某些胃病的胃蛋白酶液 B、固体酶制剂 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活； 2、溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 3、反应后会混在产物中，可能影响产品质量。(难分离） 酶制剂的缺点 1、固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。 2、固定化酶技术的优点： （1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离； （2）固定在载体上的没可以被反复利用。 （二）固定化酶 水溶性酶 非水溶性载体 非水溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 分离纯化后固定在非水溶性载体上、可投放到反应溶液中使用又能被收回的酶。 酶固定化的常用方法： a、吸附法： 将酶吸附到固体吸附剂表面的方法， 对蛋白质有高度的吸附能力、又不引起酶变性且能保持一定酶活性。如：活性碳、多孔玻璃、石英砂、有机硅等 举例：α-淀粉酶的固定化 利用蛋白质的两性性质，使其带有电荷的基团与离子交换剂形成离子键，而被交换结合在交换剂上 3 4 2 d、包埋法： 将酶包裹在多孔的载体中， 包埋成格子型或包埋成微胶囊型 c、交联法： b、共价偶联法 酶的某些基团与载体共价结合。稳定性好，酶蛋白不易脱落，但较难获得活性很高的固相酶。 利用双官能团或多官能团试剂与 酶之间发生分子交联来把酶固定 化的方法。 实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 实验目的： 1. 掌握α-淀粉酶的固定化 2. 检测固定化α-淀粉酶的效果 实验设备和材料：38页—39页 淀粉 糊精 石英砂 α淀粉酶 反应柱 分布着小孔的筛板 淀粉 糊精 葡萄糖 麦芽糖 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显蓝色 遇碘不显蓝色 α—淀粉酶 β—淀粉酶 糖化淀粉酶 实验材料制备 5mmol/L KI-I2溶液 称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。 a-淀粉酶的固定化 在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入 5g石英砂，不时搅拌，30分钟后装入反应柱中。 用10倍体积的蒸馏水洗涤此反应柱以除去未吸附的游离淀粉酶，流速控制为1ml/min。 可溶性淀粉溶液 取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。 1.α-淀粉酶的固定化 吸附 5mgα-淀粉酶+4ml蒸馏水+5g石英砂，搅拌30min 装入下端接有气门心并用夹子封住的注射器中 用10倍柱体积的蒸馏水洗涤除去未吸附的游离淀粉酶 固定化装置—反应柱 HST 层析住 实验步骤 ①用50ml小烧杯称取5g石英砂，加入4ml α–淀粉酶溶液，缓慢搅拌30分钟，使α–淀粉酶固定到石英砂上，放入注射器中。 实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 怎样使石英砂不从注射器中漏出？ 夹子、滤纸片 ②用10倍蒸馏水清洗注射器 最后一次清洗时取其上清液2滴加到点样板上，同时滴加1%淀粉溶液混匀，再加入KI-I2溶液，若溶液变为蓝色，说明未固定到石英砂上的α–淀粉酶已完全除去； 怎样保证注射器中不含游离的酶？怎样确定？ ③将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上，用滴管加淀粉溶液，使淀粉溶液约以0.3ml/min的流速过柱。 ④在流出1～2mL反应液后接收约0.5mL流出液，加入1-2滴KI-I2溶液，观察颜色。 用水稀释淀粉滤液1倍后再观察颜色。 实验后，用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱，放置在4℃冰箱中，几天后再重复上述实验，看是否有相同的结果。 样品 水 淀粉溶液 淀粉滤液 KI-I2溶液 稀释1倍 结果 ① 对照 + - - + - 碘色 ②样品1 - + - + - 蓝色 ③样品2 - - + + - 红色 ④样品3 - - + + + 浅红 2.3实验结果 实验结果 1．流出5mL后，接收0.5mL流出液，加入1～2滴KI-I2溶液，溶液呈红色。 2．几天后，再重复上述实验，与几天前的相比，结果相同 。 实验结论 淀粉被α-淀粉酶水解成为糊精 。 α-淀粉酶制成不溶性的固定化酶后，酶的稳定性增加 实验注意事项 a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟6滴（6=0.3mL/ 50uL）。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触，反应。 b.显色。在流出5mL后接取0.5mL过滤液，然后向试管中加入1-2滴KI-I2 溶液。切记，KI-I2 溶液不要加入太多，以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后的颜色。 实验思考 1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶? 2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 可在试管中