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WB实验步骤组织样品制备⑴匀浆对于心肝脾肾等组织可每50~100mg加1ml裂解液，肺100~200mg加1ml裂解液。可手动或电动匀浆。注意尽量保持低温，快速匀浆。⑵裂解后，将裂解液移1.5ml 离心管中，（若有组织残渣可继续冰上振荡30min）；然后4℃、12000rpm离心20min，取上清分装于0.5ml 离心管中并置于-20 ℃保存（-80℃长期保存）。12000g离心，4℃，2min。⑶取少量上清进行定量。⑷将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀加loading buffer后直接上样最好，剩余溶液（溶于1×loading buffer）可以低温储存，-70℃一个月，-20℃一周，4℃ 1~2天，每次上样前98℃，3min。蛋白定量2.2.1制作标准曲线（1）从－20℃取出浓度为1μg/μl的BSA（牛血清白蛋白，蛋白标准品），室温融化后，备用，使各个孔的终体积为20ul。BSA浓度（μg/μl）00.0250.0500.1000.2000.3000.4000.500BSA(μl)01248121620PBS(μl)2019181612840BSA含量(μg)002）根据样品数量（每样200μL），按50体积BCA试剂A+1体积BCA试剂B（50:1）配制适量 BCA工作液，充分混匀（刚开始混合时可能会有浑浊，但混匀后浑浊就会消失，BCA 工作液在室