实验二十二大鼠在体小肠吸收实验.docVIP

实验二十二大鼠在体小肠吸收实验 【实验目的】 掌握大鼠在体肠管泵循环法研究吸收的试验方法。掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数（ka）和吸收半衰期（t1/2（a））的方法。 【实验原理】 研究药物消化管吸收试验方法，大致可分为体外试验法、在体试验法和体内试验法等。在体试验法不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走，能避免胃内容物排出及消化管固有运动等的生理影响，对溶解药物是一种较好的研究吸收的试验方法。但本法只限于溶解状态药物，并有可能将其它因素引起的药物浓度的变化误作为吸收。 消化管吸收药物主要方式是被动扩散。药物服用后，胃肠液中高浓度的药物向低浓度的细胞内透过，又以相似的方式扩散转运到血液中。这种形式的吸收不消耗能量，其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示： 式中 为分子型药物的透过速度；D为药物在膜内的扩散系数；k为药物在膜/水溶液中的分配系数；C为消化管内药物浓度；Cb为血液中药物浓度；h为膜的厚度。 令Dk=P，P为透过常数 一般药物进入循环系统后立即转运全身，故药物在吸收部位循环液中的浓度相当低，与胃肠液中药物浓度相比，可忽略不计。若设PS/h=k’，式（1）可简化为： 式（2）说明药物透过速度属于表观一级速度过程。以消化液中药物量的变化率dx/dt表示透过速度，则 以小肠内剩余的药量的对数lnX对取样时间t作图，可得一直线，从直线的斜率可求得吸收速度常数ka，其吸收半衰期t1/2（a）为： 小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间供试液的体积，再根据测定药物的浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。 【实验内容与操作】 1. 试剂的配制 （1）0.1%NaNO2溶液：称取NaNO2 0.1g置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。 （2）0.5%氨基磺酸铵（NH2SO3NH4）溶液：称取氨基磺酸铵0.5g置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。 （3）0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液：称取二盐酸萘基乙二胺0.1g于100ml容量瓶中，加乙醇适量溶解，并用乙醇定容，摇匀。（以上试剂配好后冰箱保存） （4）1mol/L盐酸：取浓盐酸9ml置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。 （5）0.2mol/L NaOH：称取NaOH0.8g，加蒸馏水适量溶解后，转移至100ml容量瓶内定容。 （6）生理盐水：称取NaCl 0.9g置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。 （7）Krebs-Ringer试剂（pH7.4）：称取NaCl 7.8g，KCl 0.35g，CaCl2 0.37g， NaHCO3 1.37g，NaH2PO4 0.32g，MgCl2 0.02g，葡萄糖1.4g，加蒸馏水适量使成1000ml。 （8）1%戊巴比妥钠液：称取戊巴比妥钠1g置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀(10mg/ml)。 2. 供试液与酚红液的配制 （1）供试液：精密称取磺胺嘧啶（SD）20mg，酚红20mg置1000ml容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。 （2）酚红液：精密称取酚红20mg置1000ml容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。 3. 循环实验的操作 （1）蠕动泵流速的调节：插上专用电源线，按下电源开关，选择所需工作的方向；按动快、慢档开关，调节流速为5ml/min和2.5ml/min。 （2）恒温水浴调节：将水浴温度调节为37±0.5℃。 （3）供试液的准备：取75～80ml供试液加入循环装置的烧瓶中，见图3-1-1，将烧杯置恒温水浴中预热至37±0.5℃。 （4）生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃备用。 （5）大鼠麻醉：取实验前禁食一夜、体重约为200g的雄性大鼠一只，按40mg/kg体重腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，并固定于固定台上。 （6）小肠两端插管：沿大鼠腹部中线打开腹腔（约3cm），在十二指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径约0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。 （7）肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。 （8）作成回路：将肠管两