生药鉴定3------我们老师鉴定.ppt

DNA分子鉴定在生药学研究中应用 * * 2、鉴定名贵易混淆生药品种 珍稀名贵中药是祖国传统医药宝库的精粹之一,同时亦是生药品种混乱及伪劣药材的高频区。不少珍稀品种如冬虫夏草、番红花、金钗石斛、麝香、穿山甲、犀角、虎骨、天然牛黄、天然熊胆、蛤士蚂、海马、玳瑁等来源有限,采用DNA分子遗传标记技术鉴定,取样量少,避免了贵重样品的损耗,即使从动植物生物标本上直接取样也不会造成标本整体的破坏,因而具有独到的优势。 如 Fushimi等通过变异等位基因扩增技术(MASA)对matK基因片段测序发现,人参与西洋参、竹节参间的matK基因片段上第102号核苷酸序列不同,以此来鉴别人参、西洋参,结果非常可靠。 陈月琴等采用末端终止法对杜仲大分子rRNA基因(25SrDNA)5′端基因进行测序,根据序列中核苷酸的变化可有效地鉴别杜仲与其它相关类群。 DNA分子鉴定在生药学研究中应用 3、鉴定动物类生药品种 DNA分子遗传标记技术不仅能对有形的动物药整体及破碎部分器官组织进行准确的鉴定,而且对以动物粉末、体液、分泌物和排泄物入药的生药及制剂进行有效的真伪鉴定、纯度检查与质量评价,如龟鳖胶囊、纯蛇粉、鹿血粉、犀角粉、水牛角粉和麝香等。 如王义权等将RAPD标记技术用于蛇类动物的分类学研究和鉴定,结果表明RAPD标记技术不仅能够用于蛇类动物种间系统演化、种内个体间遗传多样性,并且可以用于蛇类药材的鉴定。 吴平等应用RAPD分析能有效地鉴定海马类药材。 * * DNA分子鉴定在生药学研究中应用 4、鉴定药材道地性 道地性药材的质量、疗效、产量等受到所在地的限制的原因是植物的遗传物质DNA及初生的和次生代谢过程中的酶系统发生了道地性的变化。因道地性药材与非道地性药材是同种，二者在形态和生药性状等特征上差别不明显，给鉴别带来困难，采用DNA分子遗传技术并辅以等位酶技术，可以从分子水平区分道地性药材。 如：肖小河研究表明,RAPD技术不仅能正确鉴别姜黄属不同种间群体,而且对种内等级亦能进行有效的刻划,可作为姜黄属药用植物的分类鉴定与道地性评价的新手段。 * * 刘玉萍等用PCR直接测序对6个不同产地的广藿香之matK基因和18SrRNA基因进行测序分析研究,结果表明,广藿香6个样本间的matK基因存在47个变异位点, 18SrRNA基因存在17个变异位点,结合有关挥发油化学组成数据,为广藿香的物种鉴定和道地性评价提供分子依据. 李萍等对不同产地浙贝母和金银花不同居群的5SrRNA基因ITS区的片段进行扩增和测序,结果表明不同产地或居群的同种样品5SrRNA 基因ITS区具有相同的基因型,其种内差异远小于种间的遗传距离. * * F.unibracteata F.cirrhosa F.przewalskii 浙贝母 川贝母及其伪品浙贝母幼小鳞茎的性状和显微特征 两者性状和显微特征难以区别 * * F.thunbergii * （三）荧光分析 荧光效率主要与物质的结构有关，具有π-π共轭结构的物质才能产生较强的荧光，共轭结构加长，荧光增强。 含有黄酮、恩醌、香豆素、木脂素成分的生药，一般具有较强的荧光反应。 * * * * 荧光分析法在生药鉴定中的应用 定性分析 紫外分析仪法 日光法 荧光显微镜法 荧光光谱法 1、观察生药整体 2、观察生药的新鲜断面或饮片 3、观察生药粉末 4、直接观察生药的某种溶剂浸 出液 5、将生药提取液滴于滤纸上， 挥干溶剂观察 6、生药提取液与化学试剂作用 后产生荧光 7、多重观察 定量分析：荧光分光光度法、薄层荧光扫描法 分光光度法是通过测定被测物质在某些特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 紫外分光光度法 可见分光光度法 红外分光光度法 原子吸收分光光度法 * * （四）分光光度法 一切物质都会对可见光及不可见光中的某些波长的光线产生吸收。不过其吸收的程度是不同的。即物质对不同波长的光线表现出不同的吸收能力，物质的这一特性称为选择吸收。 物质对光线的选择吸收反映了它们分子内部结构的差异。也就是说，通过研究物质得分子吸收光谱，就可以鉴别物质的分子结构。这是分光光度法对生药进行定性鉴别的依据。 物质吸收光子能量的强度，不仅取决于物质的分子结构，而且还与被光子所作用的物质的分子数目，即物质的浓度有关。这是分光光度法对生药进行定量鉴别的依据。 * * 分光光度法在生药定性分析中的应用 原理：同种生药的光谱具有一定的稳定性及重现性不同