第8章发酵工程.ppt.pptVIP

* 经自然界分离、筛选获得的有价值的菌种，在用于工业生产之前必须经人工选育以得到具一定生产能力的菌种。发酵工业的决定因素就是优良菌种的获得。 1 菌种的选育：最初，人们是从自然界寻找所需要的菌种的，但用这种方法得到的菌种，产量一般都比较低，不能满足工业上的需要。20世纪40年代，微生物学家开始用人工诱变的方法育种，就是用紫外线、激光、化学诱变剂等处理菌种，使菌种产生突变，再从中筛选出符合要求的优良菌种，如不能合成高丝氨酸脱氢酶的黄色短杆菌就是用这种方法获得的。这种育种方法已在氨基酸、核苷酸、某些抗生素等的发酵生产中获得成功。例如，在1943年刚开始生产青霉素时，青霉素的产量只有20μg/mL左右，经过长期的诱变育种，如今青霉素的产量已达到85 000μg/mL以上。 从自然界分离得到能产生所需产物的菌种，经分离、纯化及选育后，才能供给发酵使用。为保持和获得稳定的高产株，还须定期进行菌种的纯化和育种，筛选出高产量和高质量的优良菌株。同时要重视菌种的保存工作，一般采用砂土管或冷冻干燥管保存。 基因工程菌 例如：可将人工合成的人的胰岛素基因与大肠杆菌的质粒结合，形成重组DNA，再把重组DNA导入大肠杆菌细胞内形成工程菌。通过筛选则可培养出能生产人的胰岛素的菌种。 * 工业发酵要想在较短的时间内得到大量的发酵产物，这无疑需要大量的菌体。如何得到发酵生产所需要的大量菌体来缩短生产周期呢？这就需要经过多次的扩大培养。种子的制备包括两个过程：在固定培养基上生产大量孢子的孢子制备过程和在液体培养基中生产大量菌丝的种子制备过程。 因此，如何提供发酵产量高、生产性能稳定、数量足而不被其他杂菌污染的生产菌种，是种子制备工艺的关键。 问题：种子的扩大培养与发酵生产过程中的培养有何不同呢？ Q：种子的扩大培养与发酵生产过程中的培养有何不同呢？ 扩大培养是为了让菌体在短时期内快速增殖，而发酵过程中的培养是为了获得代谢产物，目的不同，采用的培养条件就有可能不同。例如：在酒精发酵过程中，扩大培养是为了促使酵母菌快速增殖，因此是在有氧条件下进行。而在发酵产生酒精的过程中则必须在无氧条件下进行以获得大量的酒精。 * 保藏菌种经无菌方式接入适合于孢子发芽或菌丝生长的斜面培养基中，经培养成熟后挑选菌落正常的孢子可再一次接入试管斜面。产孢子能力强的，及孢子发芽、生长繁殖快的菌种，可用固体培养基培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子。如生产青霉素的产黄青霉菌。 产孢子能力不强的，或孢子发芽慢的菌种可用摇瓶液体培养法，获得菌丝体，作为种子。如产链霉素的灰色链霉菌、产卡那霉素的卡那霉菌。 * 将菌体接种到装有培养液的发酵罐中，是不是发酵生产就能顺利地进行呢？不是的！还需要对发酵过程进行检测和对发酵条件进行控制。在发酵罐内部的代谢变化比较复杂，受许多因素所控制。因此要使发酵得到预期的结果，需要各方面密切配合和严格操作。 如果发酵产物是初级代谢产物，则主要在菌体生长的对数生长期产生。 如果发酵产物是次级代谢产物，则主要在菌体生长的稳定期产生。 因此，要在发酵过程中随时取样检测培养液中细菌数目、产物浓度以了解发酵进程，及时添加必需的培养基成分来延长菌体生长稳定期的时间，以得到更多的发酵产物。同时，还应对发酵条件进行严格控制，因为发酵生产中温度、pH、溶氧量等对发酵过程有重大影响。发酵过程中的溶氧量、pH、磷酸盐等都能影响产物的代谢途径，从而影响代谢产物的合成。同时，随着代谢的进行，产热的增加、某营养物质的消耗，以及某些酸性和碱性物质的产生，会使温度、pH等发生变化，这些都会对微生物的生长造成不利影响。因此，需要对发酵过程的中温度、pH、溶氧量等发酵条件进行严格的控制，以保证菌体生长和代谢途径朝着有利人类的方向进行。 * 发酵方式的分类有好多种，如根据需氧情况的不同可分为需氧发酵和厌氧发酵；根据培养基的相态分为液相发酵和固相发酵；根据发酵是在培养基表面或深层进行的分为表面发酵和深层发酵；按菌种是否被固定在载体上又可分为游离发酵和固定化发酵；按菌种的种类是否单一又可分为单一纯种发酵和混合发酵；而按发酵工艺过程的连续性则分为连续发酵和分批发酵。 分批发酵是相对连续发酵而言，它包括简单分批发酵、补料分批发酵和反复补料分批发酵三种类型。 工业上为了防止出现菌种衰退和杂菌污染等实际问题，大都采用分批培养或分批补料培养这两种方式。在微生物制药工业上更是如此。 目前常规的微生物培养发酵操作方式有三种：分批发酵、补料分批发酵、连续发酵。 * 连续发酵是个开放的系统，通过连续流加新鲜培养基并以同样的流量连续排出发酵液，可使微生物细胞群体保持稳定的生长环境和生长状态，并以发酵中的各个变量都能达到恒定值而区别于瞬变状态的分批发酵。 * 所以才主要在研究工作中使用，具体的工业化生产并不采用这种方