第04章 糖蛋白与蛋白聚糖.ppt

糖蛋白中聚糖部分的一般生物学功能 4.2.4 糖蛋白中聚糖部分的一般生物学功能 糖蛋白中聚糖部分的生物学功能是现代细胞生物学关注的中心问题之一。糖链加工或合成反应抑制剂、糖基化位点的定点突变以及糖基转移酶的反义技术或基因转染和敲除等技术的应用，使聚糖生物学功能研究有了长足的进展。糖蛋白中的聚糖不仅影响糖蛋白的折叠、聚合、溶解和降解，还参与糖蛋白的分拣和投送等细胞过程，而且还与许多糖蛋白的生物学活性有关。聚糖最重要的功能是参与细胞识别和分子识别，这些功能是蛋白质和核酸所不能替代的。因此，阐明聚糖的功能，对于洞察生物大分子在功能上的分工与合作，完全揭开生命之谜具有十分重要的意义。 4.2.4.1 聚糖在蛋白质分子正确折叠和亚基缔合中的作用 N-糖基化是伴翻译过程，必然对肽链折叠产生明显影响。N-寡糖前体中α1-3臂外端的Glc残基是糖蛋白肽链正确折叠的重要信号（图4.10）。ER可溶性蛋白钙网蛋白（calreticulin）也有类似于钙连蛋白的分子伴侣功能，可识别并帮助多肽链形成正确构象。糖基化抑制剂N-butyldeoxy-nojirimycin（NB-DNJ）专一抑制ERα-葡萄糖苷酶，阻断N-聚糖前体的加工；deoxymannojirimycin（DMJ）专一抑制Golgi体α-甘露糖苷酶I，中断寡糖加工，形成高甘露糖型N-聚糖。酪氨酸酶有6个糖基化位点和两个Cu2+结合位点，其中3个糖基化位点在活性中心附近。用NB-DNJ处理小鼠黑色素瘤B16细胞，所合成的酪氨酸酶3个糖基化位点连接的是未经加工的N-寡糖前体（十四糖），没有Cu2+结合能力和酶活性。用DMJ处理后，酪氨酸酶N-寡糖加工停留在高甘露糖型阶段，但此时肽链折叠已经完成，酶仍具有Cu2+结合能力和催化活性。结果表明，糖链可影响肽链的正确折叠，为天然构象的形成和酶活性作出贡献，糖链本身并不是活性中心的组分，其结构的变化未引起酶失活。 乙型肝炎病毒外壳由大（L）、中（M）和小（S）三种亚基组装而成。这3个亚基是同一mRNA从3个不同起点开始翻译而生成的。M亚基前体Pre S-2区段中Asn-4的糖基化与病毒蛋白的整合及分泌有关。L、M、S上S段的Asn-146也被糖基化，但Asn-4上的N-寡糖前体经ER α-葡萄糖苷酶途径开始加工，Asn-146上的N-寡糖前体则经由Golgi体内切甘露糖苷酶途径进行加工。在NB-DNJ存在下，M亚基上Asn-4 N-寡糖前体不能进行加工，影响其正确折叠以及与L和S的组装，细胞只分泌较小的不含核酸的亚病毒，因而没有感染性。有人已在研究利用α-葡萄糖苷酶抑制剂治疗乙型肝炎、爱滋病等病毒性感染的可能性。 4.2.4.2 聚糖对蛋白质的屏蔽效应 聚糖覆盖于糖蛋白表面，一个单糖大约覆盖约0.6nm长度的表面积，聚糖越大，天线数越多，覆盖的面积就越大，对糖蛋白抗御蛋白酶水解具有重要的意义。如运铁蛋白（Tf）受体是质膜上的糖蛋白，它的251、317和727位的Asn上各有一个N-聚糖，如果Asn-251突变而不能N-糖基化，就不能形成正常的二聚体和定位于质膜，随即被细胞内蛋白酶迅速降解。Tf受体Arg 102和Leu 101也是蛋白酶作用部位，正常情况下，有Thr 104 O-Gal NAc糖链的屏蔽使其免受蛋白酶攻击。牛胰RNase B Asn 34上有一条高甘露糖型N-聚糖，而RNase A没有糖链。3种糖链大小不同的RNase B对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抗御能力比RNase A增大6～10倍，这两种蛋白酶降解RNase B的速度与它的N-聚糖Man残基数成反比。 糖蛋白基因在缺乏糖基化酶系统的大肠杆菌中表达，因产物缺少糖链使肽链不能正确地折叠，还可引起异常聚集，因此常形成包涵体很少分泌出细胞。在大肠杆菌中表达的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）因缺乏糖基化而被免疫系统识别，产生抗体。正常的GM-CSF抗原决定簇被近旁的O-Gal NAc糖链屏蔽。 4.2.4.3 聚糖在糖蛋白细胞内分拣、投送和分泌中的作用 溶酶体蛋白上带有Man-6-P的高甘露糖型N-聚糖是其分拣和投送的信号。合成Man-6-P的关键酶N-乙酰氨基葡萄糖磷酸转移酶的缺失导致溶酶体酶无法投送到位，造成胎死腹中。尽管并非全部糖蛋白的分拣和投送都离不开糖链，但用Glc NAc-1-磷酸酶抑制剂衣霉素（tunicamycin）处理细胞阻断N-寡糖前体组装，导致许多质膜蛋白质无法投送。原因可能是无糖链的蛋白不能正确折叠和组装；或其ER滞留信号KDEL模体失去屏蔽暴露在外；或因暴露蛋白酶攻击位点而被迅速降解。 IgM和IgA的每条重链各有3～5条糖链，IgG每条重链有1条糖链。未糖基化