5.3血红蛋白的提取和分离课件(人教版选修一).pptVIP

* 课题 3 血红蛋白的提取和分离 关于血红蛋白的提取和分离的基础知识 1．凝胶色谱法 分配色谱法 相对分子质量的大小 凝 胶 色 谱 法 也 称 作 ____________________ ， 是 根 据 ______________________分离蛋白质的有效方法。 2．缓冲溶液 酸 碱 1～2 种缓冲剂 水 使用比例 (1) 缓冲溶 液的作用： 在一定范围 内能够抵御 ______ 和 ______对溶液 pH 值的影响。 (2) 配制：缓冲溶液通常由 __________________溶解于 ________中配制而成的。调节缓冲剂的________________就可 以得到不同 pH 值范围内的缓冲液。 3．电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (1) 概 念： 电泳是指 __________ 在 电场 的作 用下 发生 的 ______过程。 带电粒子 迁移 (2) 两 种 常 用 的 电 泳 方 法 是 __________________ 和 _______________________，在测定蛋白质分子量时通常使用 ____________________________。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中 的迁移率取决于它所带_______的多少以及____________等因 素。 净电荷 分子的大小 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 血红蛋白的提取和分离的实验 1．流程：蛋白质的提取和分离一般分为四步：________、 粗分离、________和纯度鉴定。 纯化 2．样品处理： (1)红细胞的洗涤：目的是______________，以利于后续步 骤分离纯化。 去除杂蛋白 甲苯 血红蛋白的水溶液 (2)血红蛋白的释放：在蒸馏水和________的作用下，红细 胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液：将混合液离心后，试管中的溶液分 为 4 层，第 3 层是红色透明液体，这是_____________________。 样品处理 3．粗分离：透析可以去除样品中____________________ 的杂质，或用于更换样品的________________。 4．纯化：凝胶色谱操作。 分子量较小 缓冲液 后 较长 较慢 垂直向下的 运动，无规 则的扩散运 动 小于凝胶颗粒空 隙，分子可以进 入凝胶颗粒内部 小 小分子 物质 先 较短 较快 垂直向下的 运动 大于凝胶颗粒空 隙，分子不能进 入凝胶颗粒内 部，只能分布在 颗粒之间 大 大分子 物质 洗脱 次序 运动 路程 运动 速度 运动 方式 直径大小 相对分 子质量 分离的 种类 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 法测定蛋白质的相对分子质 量 二苯胺；沸水浴 鉴定方式 ①透析处理； ②纯化处理 ①用不同浓度的 NaCl 溶 液处理； ②用酒精处理； ③用蛋白酶处理等 去除杂质 的方式 加蒸馏水和甲苯搅拌 ①动物细胞：吸水涨破； ②植物细胞：洗涤剂、食 盐搅拌研磨等 破碎细胞 的方式 哺乳动物成熟的红细胞 鸡血细胞等含 DNA 丰富 的生物组织 材料选择 血红蛋白的提取与分离 DNA 的粗提取与鉴定 比较项目 DNA 与血红蛋白的提取和分离的实验过程比较 血红蛋白的提取与分离 【例 1】选用哺乳动物红细胞作分离蛋白质的实验材料， 有何好处( ) A．红细胞无细胞核 B．红细胞无细胞膜 C．红细胞蛋白质含量高 D．红细胞 DNA 含量高 【名师点拨】：哺乳动物的红细胞没有细胞核，提取时杂质 较少，能得到更纯净的血红蛋白。 【答案】：A 【配对练习 1】洗涤红细胞时，分离所用方法为( ) A．低速长时间离心 B．低速短时间离心 C．高速长时间离心 D．高速短时间离心 解析：洗涤红细胞时，分离所用方法为低速短时间离心。 答案：B 用疑胶色谱法分离蛋白质 【例 2】用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 ( ) A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 【名师点拨】：在凝胶小球体内部有许多贯穿的通道，当相 对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋 白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。 【答案】：D