第五其他分离方法精读.ppt

一、纸层析分离过程 二、操作技术 2.展开剂 3. 点样 4.显色、检测 三、特点及应用 柱层析 柱层析：是吸附色谱的一种，它利用吸附剂对不同物质吸附能力的差异，用溶剂将混合物的组分逐一洗脱分离的一种分离方法。 微型柱层析实验 实例: 凝胶过滤层析纯化细胞色素C 一、目的要求 1.学习和掌握凝胶过滤层析分离蛋白质的原理与方法。 2.通过凝胶过滤柱层析对细胞色素C进行纯化 二、原理 凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。 优点： a. 条件温和 b.操作简便 c. 损失少回收率高 d. 层析柱可反复使用 凝胶的类型： Sephadex: 交联葡聚糖 Sepharose：琼脂糖凝胶 Bio-Gel A Bio-Gel P：聚丙烯酰胺凝胶分子筛 Sephacryl：用N，N-亚甲双丙烯酰胺交联的葡聚糖凝胶 凝胶及柱的选择 样品上柱 分析用量：柱床体积的1—2% 制备用量：柱床体积的20—30% 洗脱收集 部分收集器、核酸蛋白检测仪 凝胶的保存方法 0.02%叠氮钠或0.002%洗必泰 三、试剂与器材 试剂：0.01mol/l Tris-HCl缓冲液，PH7.5，含0.2mol