皮肤科-细胞培养及临床应用.pptVIP

皮肤病学相关研究中所涉及的细胞培养问题 中国医学科学院皮肤病研究所 李新宇 2004年2月 细胞培养涉及的基本知识 最常见的两种生长型细胞 贴壁依赖性细胞(Anchorage-dependent cells) 贴附于不起化学作用的物质(玻璃、或塑料等无活性物质)的表面生长、生存和维持。 悬浮培养细胞(Suspension culture) 细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖。 细胞培养中常用的几个术语 细胞系(Cell line)： 原代培养物经首次传代成功后即成细胞系。 连续传代 连续传代 连续细胞系 有限细胞系 (已建成的细胞系) 细胞株(Cell strain): 由具有某些特性与标志的细胞选择或克隆化而派生的亚系。 细胞周期(Cell cycle) 细胞前一次分裂结束开始至本次分裂结束所经历的时相过程。 4个时期：S期：DNA合成期 M期：有丝分裂期 G1期：有丝分裂完成至DNA合成开始的间隙期 G2期：DNA复制结束至有丝分裂开始的间隙期 G0期：某种原因导致细胞不再沿周期进行，进入 休眠状态 细胞一代时间(Cell generation time) 单个细胞两次连续分裂的时间间隔。 群体倍增时间(Population doubling time) 在对数生长期进行计算的细胞增加一倍所 需要的时间。 克隆(Clone) 单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，它们的遗传特性相同。 细胞融合(Cell fusion) 体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使不同体细胞融合成杂交细胞(Hybrid)。 细胞汇合(Confluence) 器皿中培养的细胞彼此汇合形成单层。 原代培养(Primary culture) 从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的 培养。 传代培养(Passage)(Subculture) 细胞从一个培养器皿转移至另一个培养器皿 中培养。 再培养(Reculture) 单层细胞不经任何丢失而转移到新鲜培养基 中的过程。 集落形成率(Plating efficiency) 细胞接种到培养器皿内所形成的集落的百分率。 单个细胞 集落 克隆形成率(Cloningefficiency) 群体密度(Population density) 培养器皿内，每单位面积或体积中的细胞数(细 胞数/cm2)。 饱和密度(Saturation density) 特定条件下，培养器皿中能达到的最高细胞数 (细胞数/cm2或细胞数/cm3)。 培养基 培养基 天然培养基 合成培养基 基本培养基(通用培养基)(MEM ) 无血清培养基 无蛋白培养基 血清 基本培养基(通用培养基) 完全培养基 基本培养基的组分 四大类物质 无机盐 氨基酸 维生素 碳水化合物 pH指示剂 酚红 常用基本培养基 RPMI 1640 应用最广泛 DMEM 高糖型 4500g/L 葡萄糖，