血液中葡萄糖含量的测定.docVIP

血液中葡萄糖的测定 （邻甲苯胺法） 一 目的 掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。 二 原理 血清样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff碱）。血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在630nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。邻甲苯胺法测得正常空腹血糖值为3.9～6.11mmol / L? 即100ml血清中葡萄糖的正常值为70～100mg 。 ?
邻甲苯胺法对葡萄糖特异性高，测定结果为真糖值，为临床上常用的血糖测定方法。此方法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。 由于血液葡萄糖在进食后明显升高，所以必须采取空腹血做血液葡萄糖测定，血细胞糖酵解作用会降低血液葡萄糖浓度，所以血液抽出后应及时测定，或用含氟化钠的抗凝剂抑制糖酵解，可稳定24小时。 三 操作 1.采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。 2.取干燥试管4支，分别标出号码，按下表添加试剂。 邻甲苯胺法测血糖操作表 试剂 ml 测定管1 测定管2 标准管 空白管 血清 0.1ml 0.1ml ── ── 葡萄糖标准液 ── ── 0.1ml ── 蒸馏水 ── ── 0.1ml 邻甲苯胺试剂 3.0ml 3.0ml 3.0ml 3.0ml 3.混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却。 4.以空白管调零，读取各管630nm处吸光度值。 5.计算 血糖 mmol/L 测定管吸光值 × 5 标准管吸光值 四 实验器材与试剂 分光光度计、沸水浴、试管、移液管、电炉、烧杯、洗耳球、试管夹。 邻甲苯胺试剂：称取硫脲 AR 级1.5g，溶于940ml冰醋酸 AR级 中，加邻甲苯胺60ml。置棕色瓶中至少可用两个月。此试剂腐蚀性极强，应避免接触皮肤。 12 mmol/L苯甲酸溶液：900ml蒸馏水中加入1.4g苯甲酸，加热助溶，冷却后定容到1L。 葡萄糖标准储存液（100 mmol / L）：称取无水葡萄糖（烘箱80烘干至恒重，干燥器中保存）1.802g，溶于80ml苯甲酸溶液中，再定容到100ml。 葡萄糖标准应用液（5 mmol / L）： 取标准储存液5ml，加苯甲酸溶液至100ml。