第六章 32P示踪技术.ppt

第六章 32P示踪技术 §6-1 示踪剂及标记方法 一、产品制剂 1．能量、半衰期： 射线能量大，1.7112Mev，测量方便，但使用时要注意防护。 半衰期较短，T1/2=14.3天，便于废物处理。 （33P，Emax=0.249Mev，T1/2=25.3天，在电镜自显影和分子生物学等领域应用较多，在后面介绍。） 2．产品形态： ① 有载体和无载体的磷酸盐： 如：32P-K2HPO4、32P-KH2PO4、32P-Na2HPO4、32P- NaH2PO4。 ② 口服液：磷[32P]酸钠。 ③ 注射液：磷[32P]酸钠、胶体磷[32P]酸铬注射液。 二、标记方法 1．肥料标记：（核农学P-320） ⑴ 合成法： ① 把32P结合到其中一种成分中去。如可在制备过磷酸钙时，在硫酸中加入32P标记的磷酸盐，用这种硫酸处理磷矿粉，制得的过磷酸钙，除有正常结构外，还有分布均匀的32P示踪原子。 32P-磷酸盐+硫酸→处理磷酸粉→ 32P-标记过磷酸钙 ② 实验室内用32P-H3PO4制备标记磷酸铵 H332PO4+NH3=NH4H232PO4 或 H332PO4+2NH3=(NH4)2H32PO4 ⑵ 交换法： 最常用的标记方法。用32P标记的磷酸盐溶液与普通过磷酸钙肥料混合，搅成糊状，保持若干小时，在此过程中不断搅拌，甚至可以加温至70℃左右，以促进肥料中的31P与加入的32P进行同位素交换，直到达到相对平衡，然后烘干，磨细备用。 ⑶ 中子活化法： 标记难容性矿粉时，用同位素交换法，其速度极为缓慢。 可直接把磷矿粉放入原子反应堆中，用中子轰击磷矿粉的方法（中子通量一般不低于1012~13n/cm2·sec），使磷矿粉中的31P获得中子后变为32P（31P+δn—→32P+r）。 这种比较方法可使磷矿粉中的其它元素同时被标记，在使用前需将短半衰期的放射性核素进行冷却衰变，在操作及样本测量时，也需要注意其它被活化的放射性核素，如45Ca、46Sc、60Co等放射性的防护和叠加干扰。 冷却(Cooling)：通过放射性衰变来减弱强放材料的放射性活度的方法。 2．土壤标记： 将32P标记液注射或喷洒到土壤中，或与土壤均匀混合。可用于测定肥料利用率、磁带土壤有效养分、研究土壤中根条活力、根际磷吸收、耗竭等。 3．植物标记： ⑴ 根部引入，用土培、水培或砂培等。 ⑵ 地上部分引入：叶面喷涂、茎根注射。 主要用于研究植物对磷的吸收、运转和代谢等。 4．离体标记： 研究磷的运转、代谢等。 5．其他： 微生物标记通过培养介质标记，单细胞藻类也可通过培养介质标记。如将32P-K2HPO4加到培养钝顶螺旋藻的培养液中，可得到32P-钝顶螺旋藻体，进而可用标记的藻体用作鱼饵料的研究和珍珠蚌摄食的研究。（核农学通报：1987，2：7－8） §6-2 32P样品的制备和测量 一、活体样和鲜样： 可以把活体测量看作是测量固体样品的特殊方式。例如，在研究32P标记的肥料自土壤进入植物体的速度时，即要进行活体测量。可用钟罩型计数管进行植物活体测量。活体测量虽然简单易行，但误差很大，一般只能粗略的定性测定。 新鲜样品的策略是把新鲜样品采回，稍许加工，不进行灰化。或烘干即进行测量。主要有“打孔法”和“匀浆法”。（见农学中同位素示踪技术 P-122）。上述鲜样组织的测样，虽然手续简便、迅速，但误差很大。一般仅能判断同位素在各组织器官中大致的放射性活度。 二、干样： 粉样：50~100mg/皿，无限薄、均匀。 三、湿灰化： 1．HClO4－H2O2法，慢灰化、起泡法。 2．H2SO4－H2O2法，消煮 葛才林等。小麦干粉0.5g，加Na2H32PO4，加3ml HClO4和3ml H2O2，加热起爆至无色，碱液稀释到10ml，闪烁测量。 四、干灰化： 500~550℃马福炉中灰化4~5h，至灰白色，用2N HNO3溶解，蒸发至半干，过滤定容。 测量方法：定标器、契伦可夫、液体闪烁测量等。 §6-3植物对磷的吸收利用和代谢研究 一、植物体内32P代谢组分的提取和分离： 见实验资料。 陈子元主编，核技术及其农业科学中的应用，P518~519。 二、磷的吸收、运转研究： 1．磷的吸收、运转和小麦生长发育的关系 王志芬等，核农学通报，93，14（4）：171~179。 2．磷在棉株中的吸收、运转和分布规律 许萱等。 3．磷素代谢研究 离体小麦根和叶中32P的转化。 （P520~521 陈子元，核技术及及其农业科学中的应用） §6-4 磷肥利用的研究 一、原理： 1．利用标记磷肥： 根据同位素稀释原理：Pf×Sf = PT ×SP = Pf/PT =SP/Sf Pf：植物中吸收自肥料的磷含量；PT：植物体内的总磷；SP：植物中比活度；Sf：肥料中比活度。 Pf/PT