1.3 核酸的理化性质及其应用 1.3.1 核酸的一般性质 ①RNA为白色粉末状,DNA是白色纤维状固体,二者均溶于水,而不溶于一般有机溶剂中,故常用冷乙醇从水溶液中将核酸沉淀出来。 ②核酸是两性电解质,但酸性强,与金属离子结合成盐,也可与碱性蛋白结合;介质pH大于4时,呈阴离子,电泳时向阳极移动;DNA在pH4~11间最稳定,超出此范围易变性。 ③大多数DNA为线性分子,长度可达数厘米,直径仅为2nm,故DNA溶液粘度很高,分子极易断裂;RNA溶液粘度较小。 1.3.2 核酸紫外吸收 核酸分子中的嘌呤和嘧啶碱基中含有共轭双键体系,因而具有特殊的紫外吸收光谱,其最大吸收峰位于260nm处。利用这一性质可定量测定核酸的含量或鉴定核酸的纯度。 纯DNA:OD260/OD280 = 1.8 纯RNA: OD260/OD280 = 2.0 样品中如含有蛋白质及苯酚等杂质,此比值明显降低。对于纯样品,读取OD260值即可算出含量;通常以1单位OD值相当于50?g/ml双螺旋DNA或40?g/ml单链DNA(RNA),或20?g/ml寡核苷酸计算。此方法简便、快速、准确。 1.3.3 核酸的变性和复性 1.3.3.1 核酸的变性(denaturation) ⑴概念 核酸的变性是指因某些理化因素的影响使维持核酸空间结构的氢键和疏水键断裂,双螺旋结
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