新支流法规程标准.docVIP

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）、传染性法氏囊病四联灭活疫苗（La Sota株+M41株+YBF003株+S-VP2蛋白） 制造及检验试行规程(草案) 本品系用鸡新城疫病毒株、传染性支气管炎病毒M41株分别接种易感鸡胚、收获感染胚液、超滤浓缩后经甲醛溶液灭活。用于预防鸡新城疫、传染性支气管炎1.1 毒种来源 制造本品用的鸡新城疫病毒La Sota株效检用新城疫强毒北京株）传染性支气管炎病毒M41株A型禽流感病毒H9亚型A/Chicken/shandong/11/05（H9N2）株（简称株），由保存和供应1.2 毒种标准1.2.1 鸡新城疫病毒株应符合下列标准 1.2.1.3 对鸡胚的毒力 将毒种用灭菌生理盐水作100倍稀释，尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚10个，每胚0.1ml，置36～37继续孵育，鸡胚应于接种后24～120小时死亡个，胎儿须有明显充血、出血病痕。 1.2.1.4 红细胞凝集价 按《中国兽药典》进行测定，含毒鸡胚液对鸡红细胞凝集价应。 不低于1:（微量法）1.2.1.6 安全性 用2～7日龄SPF雏鸡20只，分为组，第1组10只，每只滴鼻接种5倍稀释的含毒胚液0.05ml；第2组10只，不接种作为对照组在同条件下分别饲养管理，观察10日，应无不正常反应。如有非特异性死亡，免疫组和对照组均应不超过1只。 1.2.1.7 免疫原性 对龄SPF雏鸡滴鼻免疫，最小免疫剂量应≤5000EID50。 1.2.1.8 特异性 将毒种用灭菌生理盐水稀释105.0EID50/0.1ml），与等量抗新城疫病毒特异性血清混合，置中和后，尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚10个，每胚0.2ml0.1ml，观察120小时在24～120小时内不引起特异性死亡且至少存活8个，鸡胚液作红细胞凝集试验，应为阴性1.2.1.9 纯净 按《中国兽药典》进行检验，应无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染。 1.2.1.10 基础种子代数 E～E10代。 1.2.1.11 毒种保存 在-70以下，期为72个月。 1.2.2 鸡新城疫病毒北京株）应符合下列标准 1.2.2.1 对鸡最小致死量 用2～8月龄SPF鸡4只，各肌肉注射10-7或10-8稀释度的病毒液1ml，14日内应全部死于新城疫。 1.2.2.2 对鸡胚半数致死量 将毒种作10倍系列稀释，取10-、10-、10- 3个稀释度，各尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚5个，每胚0.1ml，记录接种后24～72小时死亡且胎儿病痕明显的鸡胚，计算ELD50，每0.1ml病毒含量应≥107.0ELD50。 1.2.2.3 按《中国兽药典》进行检验，应无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染。毒种保存 在-70以下，期为72个月。 应不于1:1.2.3.6 纯净 按《中国兽药典》进行检验，应无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染。 1.2.4.1 对鸡胚的毒力 将毒种用灭菌生理盐水作10000倍稀释(约含10EID50/0.1ml),尿囊腔内接种10～11日龄SPF鸡胚10个，每胚0.1ml，置36～37℃继续孵育，在接种后60～120小时内，应至少有8个鸡胚死亡。全身出血、明显水肿、肝脏坏死等病变。 1.2..2 对雏鸡的毒力 11日龄SPF鸡胚5个，每胚0.2ml，孵育观察5日，无论死胚、活胚均应测定红细胞凝集价，每个拭子样品接种的5个鸡胚中只要有1个鸡胚液的红细胞凝集价不低于1:（微量法）1.2.4.3 病毒含量 1:16(微量法)者判为感染，计算EID50，每0.1ml病毒含量应≥107.0EID50。 1.2.4.4 红细胞凝集价 毒种对红细胞凝集价（HA）应(微量法)。 1.2..5 毒种特异性 1.2..5.1 血凝抑制试验 毒种H9亚型特异性血清应为阳性反应，血清、禽流感（H5、H7亚型）阳性血清、鸡新城疫阳性血清、减蛋综合征阳性血清均应为阴性反应。 1.2..5.2 鸡胚中和试验 将毒种用灭菌生理盐水作1000倍稀释，与等量抗H9亚型禽流感病毒特异性血清混合，室温中和1小时后，尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚10个，每胚0.2ml；同时设病毒对照10个，尿囊腔内接种1000倍稀释的病毒液，每胚0.1ml，观察120小时。在24～120小时内中和组鸡胚应特异性死亡，且应至少有9个健活，鸡胚液作红细胞凝集试验应为阴性；对照组鸡胚应至少有8个死亡，且鸡胚液作红细胞凝集试验应为阳性。 1.2..6 免疫原性 不低于1:5个，每胚0.2ml，孵育观察5日，无论死胚、活胚均应测定鸡胚液红细胞凝集价，每个拭子样品接种的5个鸡胚中只要有1个鸡胚液的凝集价不低于1:1:180（微量法）1:4（微量法）1.2.4.7 纯净 按现