第十二章分子荧光资料.pptVIP

Molecular Fluorescence and Fluorometry 分子荧光光谱 分子发光光谱法简介 Molecular Luminescence Spectrometry 基本原理 分子的多重性 基态时: 大多数分子中的电子是成对的且自旋方向相反； 分子的多重性 单重态(singlet state，S) 三重态(triplet state，T) 激发态时，分子的某个电子可能会发生自旋改变，即自旋平行。 激发光谱和发射光谱的特征 分子结构及影响荧光强度的因素 1. 分子结构：具有强荧光的分子都具有大的共轭?键结构、供电子取代基、刚性的平面结构等。大多数荧光化合物都是由???*或n??*跃迁而达激发态的。 2. 荧光分子所处的化学环境对其荧光发射由直接的影响。如溶剂效应（增大溶剂极性，荧光物质光谱向长波方向移动）、温度（溶液温度降低，其荧光强度增强）和溶剂的pH等。猝灭剂影响。 荧光强度与浓度的关系 If = 2.303? I0?bc 荧光测定法的应用 Fluorescence Instrumentation 例题 荧光化合物苯并芘其一系列标准溶液测得荧光强度如下表所示，问当测得该化合物荧光强度为4.97时， 其浓度是多少？ 作业题： 下列化合物中哪个物质的荧光强度最大？ 考试要求： 平时30%；期终70% 整齐干净，试卷别用透明胶带粘； 独立自主完成考试； 题型：单选、对错、简答、计算； 色谱（50分）紫外（30）原子（10） 分子荧光（10） 基本概念原理、仪器基本流程、计算 * * * * * 光致发光 Photoluminescence 化学发光 Chemiluminescence 生物发光 Bioluminescence 分子荧光 molecular fluorescence 分子磷光 molecular phosphorescence E0 e- ?1 e- E1 heat 大多数分子 10-15s ?1 e- e- ?2 E0 E1 ? ?1 和 ?2 的关系 少数分子 E0 M=2S+1 S = 0 M=2S+1=1 M=2S+1=3 S0 S1 S2 : Vibrational relaxation（振动驰豫10-12s） 荧光 Fluorescence (10-6 to 10-9s) 猝灭 Internal conversion （内转换10-12s） 激 发 与 去 激 发 过 程 S0 S1 S2 T1 : Vibrational relaxation（振动驰豫10-12s） 荧光 Fluorescence (10-6 to 10-9s) Intersystem crossing （系间跨跃） phosphorescence 磷光（10-3 to 10s） 猝灭 Internal conversion （内转换10-12s） 激 发 与 去 激 发 过 程 外转换 弛豫 ?2 与 ?1 无关 分子 激发光 ?1 e- e- 发射光 （荧光） ?2 ?2 ?1（斯托克斯Stokes位移） 镜像对称 蒽 芴；强荧光 8-羟基喹啉 联苯；弱荧光 偶氮苯；弱荧光 杂氮菲；强荧光 在低浓度，I0一定时， If = kc If （?2）与I0 （?1）的关系 Quantum efficiency （荧光量子效率） Fluorescence quenching 荧光淬灭 1.无机阳离子发生荧光的很少，但很多能与一些有机试剂形成荧光络合物而被测定； 2.一些阴离子能使荧光减弱，可利用荧光猝灭法测定； 荧光猝灭法: 有些猝灭剂的加入，其荧光强度的减少与荧光猝灭剂的浓度呈线性关系，可用于测定猝灭剂的含量，这种方法称为荧光猝灭法。 3. 有机物 h?in 光源 入射光 单色器 h?in 样品池 发射光单色器 h?out 检测器 h?out 氙灯 高压汞灯 激发单色器 发 射 单 色 器 方形 石英池 光电倍增管 灵敏度高 （比UV-Vis高102~104） （0.1~ 0.001?g?cm-1） 选择性好 定量测定(标准工作曲线) 10.21 1.00?10-4 6.25 6.00?10-5 3.22 3.00?10-5 0.98 1.00?10-5 0 0 If 化合物浓度（mol/L） 解: c = 4.82×10-5 mol/L 1 2