4生物化学酶课稿.ppt

* 举例 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 COOH CH 2 CH 2 COOH COOH COOH CH 2 丙二酸 磺胺药物的药用机理 H2N- -SO2NH2 对氨基苯磺酰胺 H2N- -COOH 对氨基苯甲酸 对氨基苯甲酸 谷氨酸 蝶呤 叶酸 二氢喋呤 谷氨酸 对氨基苯甲酸 二氢叶酸（FH2 ） 细菌生长与繁殖 FH4 FH2 合成酶 磺胺类药物 （与对氨基苯甲酸结构相似） 对氨基苯甲酸 对氨基苯甲酸 磺胺类药物抑菌机制 H2N- -SO2NHR 对氨基苯磺酰胺 H2N- -COOH 对氨基苯甲酸 当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达最大速度；反应为零级反应 [S] V Vmax （一）米－曼氏方程式 中间产物 酶促反应模式——中间产物学说 E + S k1 k2 k3 ES E + P ※1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。 [S]：底物浓度 v：不同[S]时的反应速度 Vmax：最大反应速度 Ｋm：米氏常数 ＝ Km + [S] Vmax[S] v 当反应速度为最大反应速度一半时, Km值的推导 Km＝[S] ∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 ＝ Km + [S] Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 v 2 Vmax V= 2 Vmax （二）Km与Vmax的意义 Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； Km可近似表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Km越大，表示酶对底物的亲和力越小； Km越小，表示酶对底物的亲和力越大。 Km是酶的特征性常数 同一酶对其所催化的不同底物有不同的Km； 其中Km 最小的底物是该酶的最适底物。 Km的范围多在10-6～10-2mol/L之间。 Km只与酶和底物的种类以及反应环境（ pH、温 度、离子强度）有关，而与酶浓度无关。 6.0 ? 10?3 己-N-乙酰2葡萄糖胺 溶菌酶 2.5 ? 10?2 H2O2 过氧化氢酶 4.0 ? 10?3 D-乳糖 ?-半乳糖苷酶 2.5 ? 10?3 N-苯甲酰酪氨酰胺 1.08 ? 10?1 甘氨酰酪氨酰甘氨酸 胰凝乳蛋白酶 2.6 ? 10?2 HCO3? 碳酸酐酶 1.5 ? 10?3 D-果糖 5 ? 10?5 D-葡萄糖 4 ? 10?4 ATP 己糖激酶（脑） Km（mol/L） 底物 酶 一些酶的底物的Km Vmax 定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。 意义：Vmax=K3 [E] 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算 酶的转换数(turnover number)，即动力学常数K3。 定义 — 当酶被底物充分饱和时，每秒钟一个酶分子催化底物转变为产物的分子数。 意义 — 可用来比较每单位酶的催化能力。 酶的转换数 二、酶浓度对反应速度的影响 当[S]＞＞[E]，反应速度与酶浓度成正比。 0 V [E] 关系式为：V = K3 [E] （三）Ｋm值与Ｖmax值的测定 双倒数作图法(林-贝氏作图法) Vmax[S] Km+[S] V = 两边同取倒数 + Km Vmax v 1 = [S] 1 Vmax 1 × + Km Vmax v 1 = [S] 1 Vmax 1 × y b a x y =ax+b 双倒数作图法 直线的斜率等于1/Vmax，横轴截距为-Km 双重影响 三、温度对反应速度的影响 最适温度 酶促反应速度最快时的环境温度。 低温的应用 酶 活 性 0.5 1.0 2.0 1.5 0 10 20 30 40 50 60 温度 oC 最适温度不是一个固定的常数，它随底物的种类、浓度, 溶液的离子强度, pH, 反应时间等的影响。 例: 反应时间短，最适温度高。 反应时间长，最适温度低。 四、 pH对反应速度的影响 最适pH ： 酶催化活性最大时的环境pH。 0 酶 活 性 pH 胃蛋白酶 淀粉酶