3实验三细菌形态结构观察及革兰染色课稿.pptVIP

实验三 细菌形态结构观察与革 兰 染 色 实验目的 １掌握细菌的基本形态及特殊结构 2 掌握革兰染色的原理、方法、结果 　3 掌握油镜的使用原理及使用方法 实验原理 　 G染色原理：等电点学说 化学学说 通透性学说 　 病原生物学实验室守则 1、学生进实验室应穿好实验室专用隔离衣；与实验无关物品不准带入实验室，所有实验材料严禁带出实验室。 2、实验室内禁止吸烟及饮食。 3、严格操作规程，杜绝生物安全事故。污染标本及使用过的有菌器材放于指定的消毒缸内，统一进行消毒处理。需要培养的物品做好标记，放于指定培养箱内。 4、如在实验过程中发生有菌材料溅出、污染环境或化学药品灼伤等意外情况，应立即报告老师，以便及时处理。 5、爱护仪器设备，不经老师批准，不准自行接通、断开电源或拆卸仪器。对仪器设备造成人为损坏的，要酌情赔偿。实验结束后，仪器设备状态复原。 6、实验结束后，清洁台面、所有循环使用器材复原；安排值日生打扫卫生；检查水、电、门、窗等设施，并经实验室负责人检查认可。 7、用肥皂或消毒液洗手、脱隔离衣后方可离开实验室。 葡萄球菌 肺炎球菌 肺炎链球菌电镜图 大肠埃希菌 霍乱弧菌 概念:某些细菌在其细胞壁外包绕一层粘液性物质 生物学意义: 1.保护细菌，与细菌致病性有关 2.用于细菌的鉴别与分型 肺炎链球菌 概念：许多细菌在菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物 生物学意义 1.鞭毛是运动器官。有鞭毛的细菌能主动运动，可通过动力试验进行细菌鉴定。 2.有的细菌其鞭毛与致病性有关。 3.可作为细菌分类、分型的依据。 概念:某些细菌在一定的环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。 生物学意义 1.芽胞抵抗力强，故应以杀灭芽胞作为可靠的灭菌指标。高压蒸汽灭菌法是杀灭芽孢最有效的方法。 2.芽胞的抵抗力强，可在自然界中存在多年，是重要的传染源。但芽胞并不直接引起疾病，只有发芽成为繁殖体后，才能迅速大量繁殖而致病。 3. 鉴别细菌 每种细菌形成一种类型芽胞 芽胞的大小、形状、位置等随菌种而异，有重要的鉴别意义 二、革兰染色法 革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。由丹麦医师Christian Gram创立。 方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）媒染后，用脱色剂（乙醇）脱色，再用复染剂染色。 （一）、革兰染色原理 （二）、 G染色步骤与方法 1、涂片制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 1min 媒染（卢戈氏碘 液） 1min 脱色（95%乙醇） 30s 复染（石碳酸复红） 30s 吸水纸吸干 3、镜检（油镜下观察） 每次染色后都要进行冲洗 时间：一、一、半、半 （四）、革兰染色注意事项 涂片要均匀，不可太厚 干燥时切勿在火焰上直烤 染色时脱色最关键 细流水冲洗，不要直冲涂膜 涂片上积水不能太多，以免稀释染液 （五）、革兰染色的意义 1、鉴别细菌 通过染色将细菌分为G+、G-两大类细菌 2、研究与致病性的关系 G+菌致病一般为外毒素 G-菌致病一般为内毒素 3、指导临床用药 G+菌对青霉素、红霉素、头孢菌素敏感 G-菌对上述药物不敏感，对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感 （一）油镜工作原理 油镜的透镜非常小。在不加油的情况下，由于空气和玻璃对光线的折射率不同，因此光线透过载玻片经过空气时发生散射，很少能够进入油镜，造成物像不清。香柏油（n 1.515）的折光率与玻璃（n 1.52）相近，由于光线透入时不会因折射而减弱，因此视野明亮，物像清晰。 （二）油镜使用方法 1．对光 接通电源，打开显微镜上的电源开关，内置光源灯亮，并可调节亮度。使用油镜时，应将灯光调至最亮，聚光器升至最高，光栅完全打开。 2．标本加油 在细菌染色片的菌膜上滴加1滴香柏油，注意勿使载物台倾斜，以免镜油流淌。 3．识别并转换油镜头 油镜有三种标志：①放大倍数×100；②镜头下缘有一圈白线；③英文标识“oil”。找到油镜，旋转物镜转换器（勿用手直接掰动镜头）使油镜头转至载物台中央。 4．调焦、观察标本 从侧面观察并缓慢转动粗调螺旋，使载物台上升至油镜头浸入油中并几乎与玻片接触（注意勿使两者相碰）时为止；眼睛转向目镜观察视野，并往相反方向转动粗调螺旋缓慢下降载物台，至视野中闪现标本轮廓时为止；再转换细调螺旋调节至物像清晰。若直至油镜头脱离油滴仍未看到物象，可重复以上操作。 （三）油镜使用注意事项 显微镜属于精密仪器，使用时需仔细小心、避免震动。 调焦时切忌用力过猛、一味往一个方向调节，否则易损坏镜头或压碎标本片。 油镜头用后应下降载物台，取下标本，立即用擦镜纸顺一个方向