7第7章放射免疫技术课稿.ppt

第七章 放射免疫技术 第一节　放射免疫技术 一、原理及分类 二、常用的放射性核素 三、标记物制备及鉴定 四、抗血清鉴定 第二节　放射免疫分析 一、基本原理 二、实验方法及测定 第三节 免疫放射分析 一、基本原理 二、IRMA与RIA的比较 早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析(RIA)，稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析(IRMA)。该类技术具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析，对相关学科的发展起到了极大地推动作用。 放射免疫分析技术的灵敏度高、特异性强、精密度好, 常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。但由于放射污染和危害，常用核素半衰期短，试剂盒稳定期不长等诸多不足, RIA将逐渐被取代。 1.放射免疫技术的核心是什么？ 2.制备放射性125I标记物的基本原理是什么？有哪些方法？ 3.评价125I标记物质量的指标有哪些？ 4.用于放射免疫技术的抗体应满足哪些质量标准？ 5.放免分析中标记/未标记抗原、抗体的用量特点及与免疫复合物的量变关系？ 6.反应结束后，如何将免疫复合物与游离标记物分离开？ 7.放射免疫分析实验中，如何确定待测抗原的含量？ 8.免疫放射分析与放射免疫分析的反应原理有何不同？ 9.γ闪烁计数器记录的信号即是放射核素的衰变吗？ 10.灵敏度、特异性和测定范围，免疫放射分析与放射免疫分析有何区别？ 放射免疫技术的基本原理是放射性核素可探测的灵敏性、精确性与抗原抗体反应的特异性相结合，主要包括RIA和IRMA。RIA所用的标记物应具备高比活度、高纯度和完整的免疫活性；抗血清应具有较高的抗体亲和力、高度的特异性和适宜的工作滴度；标准品浓度需按标准进行标定；结合与游离反应物的分离（二抗法、PEG法、PR试剂法和固相法）应彻底、迅速、不影响反应平衡、非特异性低和操作简便。拟合标准曲线需根据不同检测项目和不同的要求选用恰当的反应参数。 二、IRMA与RIA比较 放射免疫分析技术的应用 思考题 小 结 * 思考题 小结 免疫技术：以抗原-抗体反应原理为基础，对样品中相应抗原或抗体进行检测。 标记技术：将可被探测的示踪物质用化学方法与化合物连接。 标记免疫分析：用可微量或超微量检测的示踪剂标记抗原、抗体，检测免疫反应结果并确定待检物。 标记免疫技术－基本概念 常见标记免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 荧光免疫技术 第一节 放射免疫技术 放射免疫 RIA 以标记抗原与反 应系统中未标记 抗原竞争结合特 异性抗体来测定 待检样品中抗原 量。 免疫放射 IRMA 以过量标记抗体 与抗原非竞争结 合，采用固相免 疫吸附载体分离 游离和结合标记 抗体。 放射受体分析 RRA 放射配体结合 分析RBA 其它 一、放射免疫技术－原理及分类 二、放射免疫技术－常用的放射性核素 125I 3H 射线 γ β 理化性 活泼 差 核素丰度 90% － 半衰期 60.2d 12.3y 标记方法 简单 复杂 标记设备 低廉 昂贵 测量条件 简单 复杂 常用标记核素 125碘-标记物的制备－标记 125I- 化学或酶促反应，将 放射性负电碘离子氧 化成碘原子或正电碘 离子，通过取代反应 置换被标记物分子中 酪氨酸或酪胺残基以 及组胺残基上的氢原 子。 125I或125I+ 125I-标记物 （混合物） Ch-T、LPO氧化 取代反应 直接标记法 三、放射免疫技术－标记物制备及鉴定 使用无还原剂的高比放射性碘源 被标记物用量要少 ch-T用量要低 控制总反应体积200μl 反应时间1-2分钟 弱碱性反应条件 间接标记法 联接标记( bolton-Hunter )预先将125I用ch-T法标记琥珀酰胺酯，制成的125I 化脂功能基团可与蛋白分子上的氨基酸残基反应，从而使待标记物被碘化。 bolton-Hun