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水处理生物学实验指导书 凌 琪 王 莉 陶 勇 2011年9月 实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 一、目的 1．学习普通光学显微镜的使用方法（本实验学习低倍镜和高倍镜的使用）。 2．通过对教学生物标本玻片或曝气池活性污泥的观察，认识微生物的形态。 二、实验器材 1．教学生物标本玻片或曝气池活性污泥。 2．显微镜、目测微尺、物测微尺、载玻片、盖玻片等。 三、实验步骤 (一)显微镜的结构和各部分的作用 图8—1所示，是微生物检验常用的显微镜，其构造分机械和光学两部分。 机械部分主要包括： 1．镜筒 镜筒长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。 2．载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔。使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。 3．调节器 镜筒内旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降镜筒。调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。 光学部分主要包括： 1． 接目镜 一般使用的显微镜具有2—3个接目镜，其上常刻有“5×”、“l0×”或“15×”等数字及符号，意即使用时可放大5倍、l0倍或15倍。观察微生物时常用放大l0倍或15倍的接目镜。 2．接物镜 接物镜装在回转板上．可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40(或45)l00(或90)。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如，用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400，如果用放大15倍的接目镜则放大倍数为40×15＝600。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。 油镜的放大倍数最大(90或100)。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短，直径就很小，所以自标本玻片透过的光线，因介质密度(从玻片至空气，再进入油镜)不同，有些光线因折射或全反射，就不能进入境头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率（n=1.52）相仿的镜油(香柏油， n=1.515)。因为这种接物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜(图8—2)。一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称干镜。 使用低倍镜和高倍镜时，一般作活体的观察，不进行染色。在观察细小动物时，低倍镜主要用来区别动物的种类和看出它们的活动状态，而高倍镜则可看清动物的结构待征，低倍镜容易看到标本的全貌，油镜在大多数情况下是用来观察染色的涂片。 3．集光器 集光器在载物台的下面，用来集合由反光镜反射来的光线。集光器可以上下调整，中央装有光圈，用以调节光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。 4．反光镜 反光镜装在显微镜的最下方至集光器。 (二)显微镜使用和保护的方法 1．低倍镜的使用法 (1)置显微镜于固定的桌几上，窗外不宜有障碍视线之物。 (2)拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而对直。 (3)拨动反光镜向着光线的来源处。同时用眼对准接目镜(选用适当放大倍数的接目镜)仔细观察，使视野完全成为白色，这是光线已经通到镜里的表示。 (4)把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到圆孔的正中央。 (5)将粗调节器向下旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰。当接目镜的尖端距载玻片约0.5cm时停止旋转。 (6)把粗调节器向上旋转，同时左眼向接目镜里观察。如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，至标本完全清晰为止。 (7)假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现时，不应在眼睛注视接目镜的同时向下旋转粗调节器，必须从第(5)步做起，以防因没有把握的旋转，使接目镜与载玻片碰触。 (8)在观察时，最好两眼都能同时睁开一面看一面画出所看到的物象。 2．高倍镜的使用法 (1)使用高倍镜以前，先用低倍镜检查，把要观察的标本放到视野正中。 (2)拨动回转板使高倍和低倍两镜头互相对换。当高倍镜移动到载玻片时，往往镜头十分靠近载玻片。这时必须注意是否因高倍镜靠近的缘故而使载玻片也随着移动。如果载玻片有移动的现象，则应立刻停止推动回转板，把高倍镜退回原处，再按照使用低倍镜的方法，校正标本的位置，然后旋动调节器，使镜筒稍微向上，再对换高倍镜头。 (3)当高倍镜已被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的标本，往往不很清楚，这时可旋转细调节器，上下移动，但不要过分移动。 3．油镜的使用法(此节在实验三中学习) (1)如用高倍镜放大，倍数还不够，则须采用油镜。用油镜以前，先用高倍镜检查，把要观察的标本放