4.色谱2课稿.ppt

测定对象拓展 检测器不同 GC与LC的比较 LC与HPLC的比较 项目 LC HPLC 色谱柱柱长/cm 10-200 10-25 色谱柱柱内径/mm 10-50 3-5 固定相粒度：粒径/μm 75-600 5-50 色谱柱入口压力/Mpa 0.001-0.1 2-20 色谱柱柱效/ 理论塔板数/m 2-50 2×105-5×104 进样量/g 1-10 10-6-10-2 分析时间/h 1-20 0.05-1.0 1、农药残留量分析 ：含氯农药 、有机磷 农药 、除虫菊等2、致癌物质 ：硝基呋喃及其代谢物、霉 素 、亚硝胺、苯并芘等3、水质分析：内分泌污染物等4、其它…… 液相色谱的应用-环保方面 1、蛋白质分析2、肽类的分析3、核酸4、氨基酸 5、其它…… 液相色谱的应用-生命方面 1、新药研发：目标物的检测、纯度等2、药品的预处理：片剂，油膏，水剂等3、体液：血、尿、脊椎液、唾液等4、抗菌素 ：青霉素 、甾族 激素 等 5、其它…… 液相色谱的应用-医药方面 高压输液泵 溶剂柜 真空脱气机 G1322A 四元泵 G1311A 装有高分子膜的真空容器。溶解气体的分子尺寸较小，与高分子膜有更强的亲和力。 只有一个泵，配有比例阀，能够在不同时间吸取不同溶剂 物理性质 硅胶纯度 色谱柱尺寸 颗粒形状 粒径 表面积 孔径 键合类型 碳覆盖率 封端 化学性质 色谱柱 物理性质 硅胶纯度 色谱柱尺寸 颗粒形状 粒径 表面积 孔径 填料硅胶的纯度 与残留金属离子浓度 担体 键合类型 碳覆盖率 封端 化学性质 固定相 UV/Vis双灯，全波长检测，需选择目标分析物的特征波长即可，兼顾强度与噪声水平 ＤＡＤ检测器 检测器 钨灯 耦合透镜 氘灯 光源透镜 消色差透镜 氧化钬滤光片 支撑透镜 Flow cell 光谱透镜 光栅 阵列 狭缝 其他检测器 MSD 进样器 高压泵 流动相 色谱柱 检测器 数据处理 化学工作站 影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。 影响分离的因素 在高效液相色谱中, 速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，而只有两项，即： H A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示： 建立液相色谱法的一般步骤 液相色谱类型 Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak Bases Ionics, Bases, Acids Compounds Insoluble in Water, Organic Isomers Ionics Inorganic Ions High MW Compounds Polymers Mode Reversed-Phase Io子n-Pair Normal-Phase Ion Exchange Size Exclusion Stationary Phase C-18, C-8, C-18, C-8 Silica, Amino, Cyano Diol Anion or Cation Exchange Polystyrene Mobile Phase Water/Organic Modifiers Water/Organic Ion-Pair Reagent Organics Aqueous/Buffer Counter Ion Gel Filtration- Aqueous Gel Permeation- Organic Silica Resin C-4, C-2 化合物类型 模式 固定相 流动相 中性 弱酸 弱碱 反相 C18, C8, C4 水/有机改性剂 离子、碱性、酸性 离对 C-18, C-8 水/有机的离子对试剂 不溶于水的化合物 正相 硅胶、氨基、腈基、二醇 有机物 离子型无机离子 离子交换 阴离子或阳离子交换树脂 水/缓冲溶液 对离子 高分子量化合物 聚合物 体积排阻 聚苯乙烯 硅胶 凝胶过滤 - 水性的 凝胶渗透 - 有机的 反相HPLC 极性:固定相 流动相 固定相 - 极性弱 流动相 甲醇, 乙腈等 - 极性强 极性小物质后出峰 正相HPLC 极性:固定相 流动相 固定相 - 极性强 流动相 己烷, 庚烷 - 极性弱 极性物质后出峰 正相色谱 20% 反相色谱 80% 正相色谱 20% 反相色谱 80% 与固定相极性相近tR长 主流 建立液相色谱法的步骤1 类型 性质 色谱分离方式 烷基C8 非极性 反相、离子对 烷基C18 非极性 反相、离子对 苯基 非极性 反相 芳硝基 弱极性 反相或正相 氰基 极性 正相（反相） 氨基 极性 正相（反相、阴离子交换） 色谱柱的类型及适用范围 建立液相色谱法的步骤2-色谱