黄孢原毛平革菌的培养实验.docVIP

黄孢原毛平革菌一、黄孢原毛平革菌 试验所用菌种黄孢原毛平革菌BKM-F-1767，密封，置于冰箱中。 二、黄孢原毛平革菌的培养基 1．黄孢原毛平革菌培养基的组成 基本培养基：2.Og 马铃薯浸出液，20g 葡萄糖，3g KH2PO4，1．5g MgSO4·7H2O，0.1mg FeSO4·7H2O，0.2mg CuSO4·5H2O，8mg 维生素B1，用蒸馏水定容到1000mL。 斜面孢子培养基：采用改良PDA培养基(L-1)：200g 马铃薯浸出液，20g 葡萄糖，20g 琼脂，3g KH2PO4，1.5g MgSO4·7H2O，0.1mgFeSO4·7H2O，0.2mg CuSO4·5H2O，8mg 维生素B1。 2．培养基的消毒灭菌 为了对微生物进行纯培养，防止杂菌污染，必须对微生物生长的培养基进行消毒灭菌。培养基的消毒灭菌步骤如下：将装有液体培养液的锥形瓶塞上棉塞，罩上牛皮纸，用线扎紧。首先在高压灭菌锅内放水，使水面超过加热电阻丝两指左右，放置好锅内桶，在锅内放入待灭菌的培养基和需消毒的物品，盖好锅盖，拧紧螺钉，打开放气阀。然后接上电源，待水烧开3min后(将锅内冷空气赶出后)，关闭放气阀，待压力升高。当温度指到121℃，压力为0．1 5MPa时，使温度压力恒定。从这时计时25min，关掉电源，等锅内温度冷却下降至0刻度，打开放汽阀放气，打开锅盖．再取出培养基及消毒物品。至此，消毒灭菌完毕。所谓“白腐真菌”，并非生物学上的概念。 第一，它不属于生物系统分类学范畴的术语，而是从功能角度上对生物进行描述和界定。 第二，它既不专指某一种真菌，也不泛指某一些真菌，而是限定为一类腐生在木质上有相同的进攻能力并造成木质发生相同的结构及外观变化——白腐的丝状真菌的总称。 白腐真菌是木腐真菌中对木质素降解能力最强的成员，是已知的能在纯培养中将木质素彻底降解为CO2和H2O的唯一的一类生物，因分解术材后留下的残留物为白色而得名。虽然其中的某些种相对于纤维素类成分而言更偏分解木质素，但是它们在腐烂木质过程中几乎是同时破坏多糖和木质素，即能在一定条件下将木质的主要成分(木质素、纤维素、半纤维素)全部降解为CO2和H2O，因在分解过程中木质不被着色，故仍保持白色。 黄孢原毛平革菌是白腐真菌的模式菌种，属担子菌纲，典型的木质素降解菌，一般腐生于树木或木材上，使木材上出现袋状、片状或有环痕状等形状的淡色海绵状团块。黄孢原毛平革菌具有发达的菌丝体。菌丝常为多核，一个细胞内随机分布可多达15个核，少有隔膜，无锁状联合。多核的分生孢子常为异核体，担孢子却是同核体。交配系统有同宗配合和异宗配合。在合适的培养条件下，菌丝生长旺盛，且喜欢在空气和水的界面上伸展，容易产生大量的无性分生孢子。分生孢子为具有疏水性且直径5～7 μm的卵形颗粒；孢子表面有小杆状结构，带负电荷，等电点接近2．5；表面组成为35％的蛋白质，20％的多糖，33％的类烃物质。分生孢子容易形成及具有数量很大的特点，为苗的种质保存、接种量化和遗传操作提供很大的便利。 在整个生活周期中，黄孢原毛平革菌的子实体阶段并不占主要地位，Gold等研究了其子实体形成的生理条件，试验表明：通过对葡萄糖和氮代谢物的抑制，可以控制菌的子实体形成，菌的子实体形成及以后的担孢子的生成。常10～14d内可诱导完成：碳源对子实体形成有很大的影响，其中Walseth 纤维素是最佳碳源。氮源的种类和浓度，菌的代谢等对子实体形成产生影响，细胞内环腺苷酸能扭转葡萄糖对子实体形成的抑制作用。研究获得了菌的子实体及担孢子提出了调节模式，从而为菌的杂交提供操作途径。 黄孢原毛平革菌的生长分为营养期(初生生长)和繁殖期(次生生长)两个阶段，它们大致对应于细菌系统生长的对数期和禁止期。营养期时，生长是线性的，生物量显著增加；繁殖期时，生长基本停止，甚至发生生物量的下降。因碳、氮营养的限制而触发了次生代谢，进入了木质素降解阶段；两者之间可能会存在一个停滞期。在液体培养条件下，接种后0～24h孢子萌发、菌丝线性生长、营养氮消耗；24～48h线性生长中止、铵透性酶活性的抑制被解除(指示氮危机)；72～96h出现木质素降解活动(合成的14C一木质素一CO2)。总之，黄孢原毛平革菌的生长和代谢活动是复杂的，又是密切与木质素的降解相关的。 黄孢原毛平革菌可在木质索细胞腔内产生大量细胞外过氧化物酶，有很强的降解木质素大分子的能力，与对其他难降解的物质一样，木质素实际上是被共代谢的。共代谢有两种方式。 一种是通常描述的情况：某种生物能将一种底物转化，却无法在这种底物上生长，即生物体不能利用这种底物的氧化所产生的能量去维持生长；这种现象被称为共氧化、无偿代谢或幸运代谢。 二种方式是：一些生物为了共同的效应，共用其生物化学资源，协同作用．对某化合物进行降解