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热 点 提 示 1. 基因工程的实质 2. 基因工程操作的四步曲及其操作实例 3. 基因工程在农业、医药生产、疾病诊断和治疗中的应用 4. 蛋白质工程的一般操作过程 答案: DNA连接酶 磷酸二酯键 质粒 小型双链环状DNA 限制酶 复制并稳定保存 标记基因 λ噬菌体的衍生物 议一议:限制酶主要存在于原核生物中,它有什么意义? 答案:限制酶在原核生物中主要是切割外源DNA,使之失效,从而达到保护自己的目的。 答案: 编码蛋白质 PCR技术 启动子 终止子 答案: 农杆菌转化法 显微注射法 插入了目的基因 转录出了mRNA 想一想:什么叫基因文库?建立基因文库有什么意义? 答案:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体细菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。建立基因文库,便于随时获取目的基因。 看一看:某研究小组在利用基因工程改造棉花时,发现转入的目的基因始终不表达,其原因可能是什么? 答案:构建基因表达载体时,可能没有加入启动子。 答案: 蛋白质 蛋白质 氨基酸 脱氧核苷酸 1.与DNA分子相关的酶 (1)几种酶的比较 (2)限制酶与DNA连接酶的关系 2.载体 (1)作用 ①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点,以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因,以便进行筛选。 (3)种类 ①质粒:一种祼露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外,能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 特别提醒:①一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此人们根据不同的目的和需要,对某些天然的载体进行人工改造。 ②限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外,这样才能保证标记基因的完整性,有利于对目的基因的检测。 1.下列有关基因工程中限制性内切酶的描述,错误的是( ) A.一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B.限制性内切酶的活性受温度影响 C.限制性内切酶能识别和切割RNA D.限制性内切酶可从原核生物中提取 解析:考查基因工程中工具酶的有关知识。大部分酶的化学成分是蛋白质,少数酶的化学成分是RNA。酶的活性受到温度和pH的影响;限制性内切酶的特点是能识别双链DNA中特定的核苷酸序列,可在特定的位点进行切割;限制性内切酶主要是从原核生物体内分离出来的。 答案:C 2.(2010·潍坊模拟)质粒作为“分子运输车”的条件是( ) ①能够自我复制 ②双链环状DNA分子 ③有多个限制酶切点 ④有标记基因 ⑤真核细胞中没有 A.①②③④⑤ B.①②③④ C.①③④ D.②③⑤ 解析:载体具备的条件是:能自我复制;有标记基因;最好有多个限制酶切点;能在宿主细胞内稳定存在并大量复制。 答案:C 基因工程技术生产凝乳酶的过程 1.基因工程的操作程序分析 (1)目的基因的获取途径 ①从自然界中已有的物种中分离出来,如从基因组文库或cDNA文库中获取。 ②人工合成目的基因 常用的方法有反转录法和化学合成法。 ③利用PCR技术扩增目的基因 通过PCR技术可对已获取的目的基因进行扩增,以获取大量的目的基因。 特别提醒:①插入的目的基因的表达需要调控序列,因而用作载体的质粒的插入基因部位之前需有启动子,之后需有终止子。 ②两次使用的限制酶为同一种酶,这样形成的黏性末端碱基之间互补,便于连接。 3.(2010·南通调研)下列关于基因表达载体构建的相关叙述,不正确的是( ) A.需要限制酶和DNA连接酶 B.必须在细胞内进行 C.抗生素抗性基因可作为标记基因 D.启动子位于目的基因的首端 解析:基因表达载体是目的基因与载体的结合,在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体,用DNA连接酶将相同的末端连接起来;基因表达载体的构建是在细胞外进行的;基因表达载体包括启动子(位于基因首端使转录开始)、终止子、目的基因和标记基因。 答案:B 4.(2010·南京调研)下列关于蛋白质工程的说法,正确的是( ) A.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作 B.蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子 C.对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的 D.蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成
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