聚合酶链反应原理答案.docVIP

试卷 一．翻译（机译和人译结合，水平有限） Principle of the PCR 聚合酶链反应原理 一个PCR（聚合酶链反应）的目的是要对一个基因拷贝。一聚合酶链反应有三个，30或40次。这是一个自动循环仪，它可以在很短的时间内反应混合物的管子。During the denaturation, the double strand melts open to single stranded DNA, all enzymatic reactions stop for example: the extension from a previous cycle . 1．在94℃变性 在变性，双链开放单链DNA，所有的酶反应停止（例如：从以前的周期扩展名）。Ionic bonds are constantly formed and broken between the single stranded primer and the single stranded template. The more stable bonds last a little bit longer primers that fit exactly and on that little piece of double stranded DNA template and primer , the polymerase can attach and starts copying the template. Once there are a few bases built in, the ionic bond is so strong between the template and the primer, that does not break anymore. 2．在不同退火 引物周围跳动的，由布朗运动引起的。离子键单链引物和单链模板打破。（引物适合完全一致），并在此小片的双链DNA（模板和引物），聚合酶能，并开始复制模板。一旦有，模板和引物离子键之间强不破了。 The primers, where there are a few bases built in, already have a stronger ionic attraction to the template than the forces breaking these attractions. Primers that are on positions with no exact match, get loose again because of the higher temperature and don’t give an extension of the fragment. The bases complemetary to the template are coupled to the primer on the 3’side the polymerase adds dNTP’s from 5’to 3’, reading the template from 3’ to 5’ side, bases are added complementary to the template . 3。 72℃延伸 聚合酶这是理想的工作温度。引物建立几个，的吸引力已经比打破这些的力量更强。引物与不完全匹配再次得到松散（因为较高的温度片段延伸。这些（到模板）引物的3耦合（聚合酶添加核苷酸从5 3 端，读模板35 端，将补充模板）。 我的见解仅供参考 答： 一，获取目的核酸的序列：对于已知的基因等序列可以在生物数据库（基因库）查到，对于未知的序列可先测序。 二，设计引物：一般由引物设计公司设计并生产，我们只要购买即可。当然高手可以利用软件自己设计，再由引物生产的公司生产即可，这样可以节约成本。 Primer设计的基本原则◆引物长度一般在18-35mer。 ◆G-C含量控制在40-60%左右。 ◆避免近3’端有酶切位点或发夹结构。 ◆如果可能避免在3’端最后5个碱基有2个以上的G或C。 ◆如果可能避免在3’端最后1个碱基为A。 ◆避免连续相同碱基的出现，特别是要避免GGGG或更多G出现。 ◆退火温度Tm控制在 58-60C左右。 ◆如果是设计点突变引物，突变点应尽可能在引物的中间。◆引物之间避免同源性 三，退火温度退火温度引物设计软件都可以给出Tm，引物长度，碱基组成，引物使用缓冲的离子强度有关。长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm 4℃ G + C + 2℃ A + T 对于更长的寡聚核苷酸，Tm计算公式为： Tm 81.5 + 16.6 x Log10