第18章細菌プランクトン全数の測定 odc.noaa.gov.docVIP

第２２章　微小動物プランクトン生物量 1.0　目的と適用分野 本章では、微小動物プランクトン生物量の測定に必要な手法について述べる。JGOFSの研究によると、微小動物プランクトンは海洋表層混合層において多数存在し、そこでの有意な貯蔵性有機炭素となっている (Burkill et al., 1993, Harrison et al., 1993, Verity et al., 1993)。 2.0　定義 微小動物プランクトンは、Dussart (1963) によれば、広義に、長さ200μmの貪食栄養型生物と定義される。操作上の便宜のため、微小動物プランクトンには、 Sieburth et al. (1978) のピコ及び、ナノ動物プランクトン(それぞれ0.2-2μm と 2-20μm）を含める。ただし、後者はセクション７で別に取り扱う。 微小動物プランクトン生物量は、単位海水量当たり微小動物プランクトン有機炭素量として定義される。単位は　?gC liter-1。 3.0　原理 微小動物プランクトン生物量は海で採集し新鮮なうちに固定した海洋試料で測定する。方法によっては野外での化学処理やスライドマウンティングが必要な場合もある。固定した試料は海で計測しても、後で実験室で顕微鏡検査を行っても良い。顕微鏡分析は微小動物プランクトンの計数と大きさの測定を含む。各微小動物プランクトンの分類群に幾何形状を割り当て生物容積を計算する。これらを適切な容積対有機炭素比を用いて有機炭素としての生物量に換算する。微小動物プランクトン群集の生物量は個々の生物量の合計を、元の試水体積で割ったものである。 微小動物プランクトンのサイズの範囲(約2-200 μm)では、２つの異なる微小動物プランクトンの定量手順が必要である。大きいほうの微小動物プランクトンは沈殿によって定量できるが、小さい方の細胞はフィルターに集めなければならない。 4.0　器具 この研究には、研究レベルの倒立/蛍光顕微鏡と沈殿管が不可欠である。画像解析システムとApsteinネットもあれば望ましいが不可欠ではない。コンピュータや表計算ソフトウェアのような他の器具は整備の行き届いた海洋学研究室の標準的なものを前提とする。 5.0　試薬類 5.1 ルゴールの沃素液．酸性ルゴールは繊毛虫類を保存するのにすぐれているが石灰化された物を溶解してしまう。石灰化された微小動物プランクトンが重要なところでは、別のサンプルとして、緩衝済みホルムアルデヒドで保存する。 5.2 ストロンチウム硫酸塩．Acatharians（棘針類）の保存に用いる。 5.3 グルタルアルデヒド：　25%等級II(Sigma)　を用いる。グルタルアルデヒドは試料保存用に用いるまで冷凍保存しておく。 5.4 プロフラビン(Proflavin) 5.5 DAPI 5.6 緩衝済みホルムアルデヒド：４ホウ酸ナトリウムまたはヘキサミンで飽和させた37%ホルムアルデヒド溶液。 5.7 固定液や保存液は有毒で発癌性らしき場合もあることに注意。常に適切な注意をおこたらないこと。 6.0CTD/ロゼットもしくはニスキン採水器でとる。原生動物の多くは敏感なので船上では試料は注意して扱うこと。試料にとって最適な方法は試料を、予め固定液／保存液を入れた、容器にサイフォンで入れることである。試料はできるだけ早く固定する。ニスキン採水器の底の小さな径のバルブから排水すると生物によっては傷められるものもある。 7.0　手順 微小動物プランクトン生物量の定量化にはふたつの相補的手法が必要である。繊毛虫類の多くや渦鞭毛藻のような大きな生物（約 20-200μm)は倒立顕微鏡検査で計量する（下の7.1参照）。鞭毛虫類のような小さな生物（約 2-20μm)は染色した試料を顕微鏡スライドに載せて蛍光顕微鏡分析によって計数する（下の7.2参照）。これらはただちに処理するか分析まで冷凍貯蔵しておく。冷凍したスライドは１度貯蔵したら、解凍?再冷凍せずに分析する。 蛍光顕微鏡にはi)UV励起と青色発光とii)青励起と緑?赤色発光のフィルターセットが必要である。分析はx63またはx100対物レンズで行なう。フィルター上のランダムな視野または一列の視野を調べ、細胞は目視か画像解析で計測しサイズを求める (Verity Sieracki,, 1993)。 細胞への励起光の照射は最小にとどめる。 7.1 倒立顕微鏡による動物プランクトン（約 20-200μm)全数と生物量の定量化．微小動物プランクトンの濃度に応じて250mｌから2Lの海水をニス