专题3___植物的组织培养技术2资料.ppt

菊花的组织培养 月季的花药培养 * 俗语“无酒不成席”、“开门五件事、油盐酱醋茶”。酒和醋是人们日常生活离不开的传统发酵产品。从这节课开始，我们以果酒、果醋等为例学习一些传统发酵技术。 俗语“无酒不成席”、“开门五件事、油盐酱醋茶”。酒和醋是人们日常生活离不开的传统发酵产品。从这节课开始，我们以果酒、果醋等为例学习一些传统发酵技术。 专题3 植物的组织培养技术 课题1 一、基本原理： 植物细胞的全能性 二、基本过程： （又叫外植体） 离体细胞、 组织、器官 愈伤 组织 胚状体 丛芽等 新个体 脱分化 再分化 生长 三、影响因素： 材料、营养、激素、环境条件 1、材料： 植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响 实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部 新萌生的侧枝作材料。选取生长旺盛嫩枝进行组培的原 因是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。 2、营养： 常用的培养基是MS培养基，其中含有的 大量元素有N、 S、 P、 Ca、 Mg 、 K； 微量元素有Mn 、Co、B、Zn、Cu、Cl、Ni、Fe、 I 、 Mo ； 有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。 3、激素： 在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素， 其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。 促进愈伤组织 生长 比值适中 促芽分化， 抑根形成 比值低时 促根分化， 抑芽形成 比值高时 生长素／细胞分裂素 比值与结果 分化频率提高 同时使用 细胞既分裂也分化 先细胞分裂素， 后生长素 有利于分裂但不分化 先生长素， 后细胞分裂素 实验结果 使用顺序 4、环境条件： 菊花组培所需PH为5.8，温度为18-22℃， 光照条件为每日用日光灯照射12小时。 四、操作流程 1、配制MS固体培养基 ①配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。 使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。 ②配制培养基：加入琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、 有机物和植物激素的母液，用蒸馏水定容，调PH后分装。 在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎 段组织培养比较容易。 ③灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 PH、温度、光等 2、外植体的消毒 3、接种 消毒时，既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受力。 用70％的酒精消毒工作台，点燃酒精灯。注意所有接种工作 都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用火焰灼烧灭菌。 接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种 6～8个外植体。 旺盛 嫩枝 流水 冲洗 刷洗，冲洗 20分钟左右 无菌吸水纸 吸干表面水分 70％的酒精 摇动2-3次6-7S 无菌水 清洗 无菌吸水纸 吸干表面水分 氯化汞 溶液 浸泡1～2分钟 无菌水 清洗3次 4、培养 应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜 的温度和光照。 5、移栽 移栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日， 然后用流水清洗根部培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石 或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。 6、栽培 将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时 浇水、施肥，直至开花。 课题2 一、被子植物的花粉发育 被子植物的花粉是在花粉囊中由花粉母细胞 经过 减数分裂形成的。其过程如下： 由此可见，被子植物的花粉的发育要经历 四分体 时期， 单核 期和 双核 期等阶段。 小孢子母细胞（2n） 小孢子四分体时期（n） 单核居中期（n） 双核期 生殖细胞核（n） 花粉管细胞核（n） 生殖细胞（n） 营养细胞（n） 2个精子 n 有丝分裂 减数分裂 单核靠边期（n） 有丝分裂 二、产生花粉植株的两条途径 2．这两种途径的区别主要取决于培养基中 激素 的种类及其 浓度 的配比。 1．途径图解：  3．胚状体的结构及其发育过程与种子相似，所以把胚状 体到从芽的过程称为 分化 ，而把从愈伤组织到从芽的 过程称为 再分化 。 移栽 生根 丛 芽 花药中 的花粉 脱分化 愈伤组织 胚状体 再分化 分化 诱导 丛 芽 三、影响花药培养的因素 主要是 材料的选择 和 培养基的组成 材料的选择： 除此之外，植物的种类、亲本生长条件、材料的低温处理、接种密度、培养基组成、培养的环境条件等也会影响花粉诱导的成功率。 ①从花药来看，应当选择（初花期）的花药； ②从花粉来看，应当选择（单核期）的花粉； ③从花蕾来看，应当选择（完全未开放）的花蕾。 四、实验设计 1、材料的选择 ①选择花药时一般通过 镜检 确定花粉发育时期，此时需 要对花粉细胞核进行染色，最常用的染色剂是 醋酸洋红溶 液 和 焙花青－铬钒溶液 ，它们分别可以将细胞核染成 红 色和 蓝黑 色