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* * 二、光度测量误差及实验条件的选择 （一）光度测量误差（偏离朗伯—比尔定律） 克服非单色光引起的偏离: 1 应选择比较好的单色器。 2 应将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。在此最大吸收波长附近各波长的光的 k 值大体相等，由于非单色光引起的偏离要比在其他波长处小得多。 介质不均匀性：朗伯－比尔定律是适合于均匀，非散射的溶液。 如果被测溶液不均匀，是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光通过溶液后，除一部分被试液吸收外，还有一部分因散射现象而损失，使透射比减少，因而实测吸光度增加，使标准曲线偏离直线向吸光度轴弯曲。故在光度法中应避免溶液产生胶体或混浊。 （二）实验条件的选择 （1）溶剂选择 溶剂应能很好地溶解被测试样，溶剂对溶质应该是惰性的。即所成溶液应具有良好的化学和光化学稳定性。 在溶解度允许的范围内，尽量选择极性较小的溶剂。 溶剂在样品的吸收光谱区应无明显吸收。 （2）测量波长的选择 为了提高测定的灵敏度，入射光的波长应选择被测物的最大吸收波长λmax，如果λmax有干扰，可选择另一条灵敏度稍低，但能避免干扰的谱线，所以，适当选择入射光的波长，还能提高测定的灵敏度。 （3）控制适当的吸光度范围 0.2-0.8 当光吸收值小于0.1和大于1.0时，测量偏差超过10%，而当在0.1-1.0之间时，测量偏差小于10%，测量值有效可信。 可从两个方面着手解决： a.控制被测物浓度 b.改变吸收池的厚度 （4）选择适当的参比溶液作空白 用参比溶液调节仪器的零点，以消除由于样品池及溶剂、干扰物质对入射光的反射和吸收带来的误差，所以根据不同情况选择不同的空白。 第五部分 仪器的使用操作及维护 一、仪器的使用操作规程 1.准备工作 1.1打开光度计主机电源（预热20-30 min）。 1.2开启计算机电源。 1.3 双击[UV-Probe]图标，即启动UV-2450的控制程序。 1.4 单击[连接]键，进入光度计自检，自检过程中切勿开启样品室门。自检完毕后，单击[确定]键进入检测界面。 2. 测定 参数和显示的设置、空白基线校正、供试品测量、 光谱测定、数据处理 。 3.仪器使用完毕，取出样品室内吸收池，退出UV-Probe软件系统。 4.关闭计算机。 5.关闭光度计电源。 6.按要求做好仪器使用登记。 二、仪器的维护 1.温度和湿度 室温保持在15～35℃，相对湿度宜控制在45%～80%。 防尘、防震、防电磁干扰，仪器周围不应有强磁场。不要暴露在阳光直射的地方，不要放在有腐蚀性气体或在UV波长范围内有吸收的有机和无机气体的环境内。 2.如果开机后钨灯和氘灯不亮，应首先检查保险丝。若断了应更换新的保险丝。注意更换保险丝时，关闭电源开关并切断电源。 3.为了防止光电管疲劳，不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。 4.光度计灯源寿命有限，若长时间不测量，应通过UVProbe软件断开连接（点击“Disconnect”），然后关闭光度计电源。 5.仪器自检和扫描的过程中，不要打开样品室盖。 6.软件不会自动保存数据，所有的数据要保存都必须点击“Save”或者“Save As”进行另存。否则数据会丢失。 7.样品室的出射和入射石英窗不应有污染，不要用手触摸样品室中透光窗面，若不小心接触过，要用无水乙醇擦拭。 8.比色皿的使用方法 ① 拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。 ② 清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。如比色皿被有机物沾污，可用盐酸-乙醇混合洗涤液（1∶2）浸泡片刻，再用水冲洗。不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗比色皿，以免损坏。也不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。每次做完实验时，应立即洗净比色皿，用干净绸布或擦镜纸擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防尘保存。 ③ 比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干，避免硬的物品把透光面划伤，以保护透光面。 ④ 测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。 ⑤ 吸收池装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖。 9.注意软件的正常交流，防止计算机病毒感染。 10.在停止工作期间，主机样品室内应放入袋装硅胶干燥剂。用防尘罩罩住整个仪器。 三.期间核查 （1）外观检查 1.1 样品室应密封良好，无漏光现象。干燥剂的位置摆放合理，无阻挡光路情况。 1.2 吸收池的透光面应光洁，无划痕和斑点，任一面不得有裂纹。 1.3 仪器与计算机的接口处接触良好，光源工作正常，无灯丝熔断问题。 （2）波长准确度的校正 利用氘灯