分光光度法在药品中应用探究.pptVIP

测定要求： 通常为测定最大吸收峰波长处的吸光度 供试品溶液在测定波长处浓度与吸光度严格遵循比耳-郎伯定律，具有良好的线性关系。 测定条件和操作应与测定吸收系数时完全一致。 吸收系数是用标准物质分别在经过校正的不同型号分光光度计上进行多次测定求得的平均值。 特别注意仪器的校正和检定 计算公式： A=ECL 以《中国药典》2000年版氯霉素含量测定为例: 精密称取氯霉素0.1009g，置100ml量瓶中， 加乙醇10ml振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀， 精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻 度，在278nm波长处测定吸光度为0.596，按氯 霉素(C11H12Cl2N2O5)吸收系数(E1%1cm)为298计 算氯霉素含量。 已知：A=0.596 E=298 L=1 则： C=A/(E*L)=0.596/(298*1)%=0.002% 氯霉素含量 =0.002%*100*100/(0.1009*2)=99.1% （3）比色法 供试品本身在紫外－可见光区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收，但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定 盐酸可乐定片及注射液：在适宜的pH值条件下，溴酚蓝溶液与盐酸可乐定定量结合成有色络合物，用氯仿提取后，直接比色测定，对照品同法操作，并计算含量。 小结： 紫外-可见分光光度法具有灵敏度和精密度高，操作简便、快捷等优点。已成为药品检验的一种不可替代手段。目前各国药典及药物标准中含量测定采用的方法以分光光度法最多。在医院制剂的质量控制中紫外-可见分光光度法也得到普遍的应用。 紫外-可见分光光度法在药品检验中的应用 1 2 3 4 分光光度法的基本原理 紫外分光光度计 紫外－可见分光光度法在药检中应用 content 概述 一.概述： 分光光度法是通过测定物质在某些特定波长处或一定范围内的吸光度或发光强度，对物质进行定性和定量的分析方法。紫外-可见分光光度法具有操作简便快速、专属性和灵敏度高等优点。因此在药品的分析检验中被广泛采用。在各国药典中药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等各个项目中都能见到紫外-可见分光光度法的应用实例。 一.概述： 吸收光谱：发射连续光谱的光源（如氘灯和钨丝灯）发出的光通过透明物质（固体、液体或气体）后，一些波长的单色光成分被该物质选择吸收，在原来的连续光谱上出现若干条暗线或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。 1 2 3 4 分光光度法的基本原理 紫外分光光度计 紫外－可见分光光度法在药检中应用 content 概述 二.分光光度法的基本原理 在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高，一般每1ml溶液中含有几微克（?g）的物质即可测定，误差约为1-2%，在此区域内，物质对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁所致，同时伴有分子的振动和转动能级的变化，电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不如红外光区，故紫外-可见光区主要用于定量分析以及作为物理常数的测定。 红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需要数百微克（?g）的供试品进行测定，此区域内，物质对光的吸收系由分子中振动和转动能级的跃迁引起，红外光谱的特征性很强，特别是在7-15?m（称为“指纹区”），吸收峰很多，而且尖锐。除光学异构体外，不会遇到两种不同的化学物质完全相同的红外吸收光谱，故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。 透光率（T）：单色光通过一物质的溶液时，透过光的强度（I）与入射光的强度（I0）之比。即：T=I/I0。 吸光度（A）：透光率的负对数值.即:A=log1/T= -logT 比耳-郎伯定律（Beer -Lambert’s Law）：吸光度（A）与溶液的浓度（C）和光路长（L）是成正比例的。即：A=ECL 比耳-郎伯定律适用范围： 1.溶液的浓度不能过高或过低，使测定结果的相对误差最小的最佳透射率为T=37%左右。 2.所用溶剂不得与测定物质有分子间缔合，生成复合物、异构化或出现酸碱平衡。 1 2 3 4 分光光度法的基本原理 紫外分光光度计的使用 紫外－可见分光光度法在药检中应用 content 概述 三.紫外-可见分光光度计的使用 1.基本构造： 稳压电源 光源 波长选择装置 样品池 检 测 器 记录装置 2.仪器的校正和检定 （1）波长的校正：由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。 钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、 360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、 536.2nm与637.5nm的波长处有尖锐的吸收 峰，可作为波长校正用。 取在120?C干燥至恒重的基准重铬酸