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第十八章：医药基因工程 生物药物:指利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学和药学的原理与方法制得的药物的总称。 包括：生化药物、基因工程药物和生物制品。 基因工程制药: 将药物蛋白或多肽的编码基因通过特定的载体导入特定的受体细胞中，通过受体生物或者细胞表达出药物蛋白或多肽，最后将其纯化并制成药剂的过程。 如：胰岛素、重组人干扰素、基因工程乙肝疫苗、重组人红 细胞生成素 第一节 基因工程药物的开发现状与发展趋势 基因工程药物的分类： 按结构组成：蛋白多肽类药物 基因工程疫苗 核酸类药物 基因工程化学药物 按作用方式：基因水平作用药物 转录水平药物 蛋白质水平药物 按作用机理： 蛋白或多肽类药物，通过蛋白自身的生理生化特性而抵抗疾病基因工程疫苗、基因工程抗体和DNA疫苗，基于抗原抗体反应的原理而抵抗疾病 反义核酸、核酶和RNAi，基于中断基因表达而抵抗疾病 发展趋势： 反应器的变迁：大肠杆菌、酵母等 真核细胞表达系统 动植物反应器 从基因工程到蛋白质工程：通过定点诱变、功能域交换、分 子进化等手段, 开发出活性提高、适应性改善和专一性 增强的蛋白药物。 从蛋白质药物到核酸药物：在蛋白类基因工程药物的基础上 发展出了核酸类基因工程药物, 提供产生蛋白的基因, 通过破坏和扩大基因的功能来克服疾病, 具有更强的选 择性和更高的效率。 合成生物学的兴起： 利用合成生物学生产青蒿酸示意图 第二节：基因工程蛋白和多肽药物 主要是指重组激素和重组细胞因子 一、基因工程胰岛素： 方法一、利用大肠杆菌为受体，分别表达胰岛素A链和B链，再分别提取和纯化产生的A链和B链，最后利用化学方法使两条链之间形成二硫键，从而得到胰岛素； 方法二、以酵母为受体分泌表达人胰岛素，在胰岛素编码基因前端增加一个信号肽编码序列，这个信号肽引导合成的胰岛素从细胞内分泌到周围的培养基中，最后通过酶学反应使之变成人胰岛素。 胰岛素 德谷胰岛素 重组红细胞生成素：将编码人红细胞生成素的基因装入哺乳动物细胞表达载体， 转染二氢叶酸还原酶缺陷的中国仓鼠卵巢细胞（Chinese hamster ovary , CHO） 细胞（CHO-dhfr–）株，并进一步筛选获得高产人红细胞生产素的CHO。经过一系列细胞培养和蛋白质纯化等工艺制备过程，产生有生物活性的重组人EPO (erythropoietin ，成熟人红细胞生成素)。 基因工程干扰素：将干扰素编码基因通过合适的表达载体，导入大肠杆菌进行表达可产生大量干扰素，经过分离纯化便可制成药物制剂。 基因工程疫苗：疫苗一般是由灭活或减毒的病原体做成的可预防相应病原物引起疾病的药物, 通过接种人或动物在其体内建立抗感染免疫反应而产生保护作用。 将基因工程技术应用于疫苗生产所得的疫苗即为基因工程疫苗, 可有效的避免潜在的污染物。 亚单位疫苗 无毒疫苗和减毒活疫苗 疫苗载体 核酸疫苗 重组乙型肝炎疫苗： 重组酵母乙型肝炎疫苗 重组中国仓鼠卵巢细胞乙型肝炎疫苗 治疗性乙型肝炎疫苗 第三节：基因工程抗体 基因工程手段可以很好地解决天然抗体的某些局限性 抗体分子的结构 基因工程抗体的种类 单克隆抗体的人源化： 人-鼠嵌合抗体 ：通过基因重组技术，将鼠源单克隆抗体的Fv 片段替换人源抗体的相应片段所制成的。 人源化抗体：是对嵌合抗体进一步改进的结果，即仅用鼠源单 克隆抗体的CDR区替换人源抗体的CDR所获得的杂合抗体。 人-鼠嵌合抗体 人源化抗体 小分子抗体： 抗体改造时保留抗原结合位点，根据构建方法不同，可分为： Fab抗体：抗体的Fab片段由重链的V区和CH1区与轻链以硫 键相连，能发挥抗体的抗原结合功能，其大小只有完整 抗体的1/3。 单链抗体(ScFv)：将抗体的VH和VL用连接肽连接，形成 具有抗原结合能力的单链抗体多肽，即所谓的单链抗体。 单域抗体：抗体结合抗原的部位主要在V区，只含有V区的 小分子抗体。 超变区多肽：抗体与抗原的结合是通过V区的CDR区来实现 的，CDR区是抗原抗体结合的最小识别单位。由单个 CDR多肽构成的小分子抗体称为超变区抗体。 双体抗体：将2种不同抗