第21讲 基因工程分析.ppt

祝同学们前程似锦! 2.(2012·福建卷)肺细胞中的let－7基因表达减弱， 癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利 用基因工程技术将let－7基因导入肺癌细胞实 现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基 因工程技术基本流程如图1。 图1 图2 限制性核酸内切(或限制)　 启动子 胰蛋白 请回答： (1)进行过程①时，需用_____________________ 酶切开载体以插入let－7基因。载体应有RNA聚 合酶识别和结合的部位，以驱动let－7基因转录，该部位称为________。 (2)进行过程②时，需用________酶处理贴附在 培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。 (3)研究发现，let－7基因能影响癌基因RAS的 表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞 中提取________进行分子杂交，以直接检测 let－7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制， 可能是由于细胞中________(RASmRNA/RAS蛋白) 含量减少引起的。 RNA RAS蛋白 祝同学们前程似锦! 最近在基因工程教学，对2011年高考题学生有疑问， 我也解释不清楚，就借助绍兴柯桥中学叶建伟老师 的解释，选部分供大家参考。 例题（2011年高考理综浙江卷第6题）将ada（腺苷酸脱 氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺 苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是? ?A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 ?B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 ?C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada ?D．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 参考答案：C? 考生对A和D选项基本没有异议，B和C二个选项在师生中 引起广泛争议，甚至有人认为试题存在科学性错误。下 面是一些具有代表性的错误观点和笔者（叶建伟老师） 对相关疑难问题的阐述（节选）。 1?重组质粒是否含有限制性核酸内切酶识别位点 ? 认为B选项表述的含义是错误的原因分析： 目的基因和质粒能够形成重组质粒的关键是目的基因和 质粒被限制性核酸内切酶切割后具有相同的粘性末端。 形成相同的粘性末端可以采用两种方法： ①用相同的限制性核酸内切酶切割目的基因和质粒； ②用同尾酶切割目的基因和质粒。若选择同尾酶分别 切割目的基因和质粒，再由DNA连接酶作用形成重组 质粒。该重组质粒可能无法被同尾酶中的任何一种 限制性核酸内切酶识别和切割。 实际上基因工程技术的操作过程中会遇到很多问题， 如重组质粒导入受体细胞后，目的基因的表达可能会 出现目的基因不表达、表达水平过低或过高、表达产 物的氨基酸序列差错等多种表达异常情况。当出现目 的基因的表达异常时，需要回收目的基因，并对目的 基因进行加工修饰，最终使目的基因表达出人们所预 期的效果。因此在构建重组质粒时，要求连接形成的 “接点”序列，必须能被特定的限制性核酸内切酶识别、 切割，以便回收插入质粒的目的基因 2?质粒的每个限制性核酸内切酶识别位点是否都要插入 目的基因 认为C选项表述的含义是正确的原因分析：具有一种或 多种限制性核酸内切酶的单一切割位点是理想质粒载体 的基本条件之一， 同时该切割位点就是目的基因的插入位点。也就是说如果用某一特定的限制性核酸内切酶（如BamHⅠ）作用于基因工程质粒载体（如pET28b）只会产生一个切口， 故认为该切口插入一个目的基因（如ada）是目的基因成功表达（如合成腺苷酸脱氨酶）的前提条件。 基因工程通常不选择天然质粒直接作为目的基因的载体， 而选择以天然质粒为基础，人工改造和组建形成的实用 质粒作为目的基因的载体。这种实用质粒不是单纯为某 一目的基因构建的，而需要有较广泛的使用功能，也就 是说要能够和多种目的基因形成重组质粒。由于不同的 目的基因两端的碱基序列存在差异，因此提取不同的目 的基因选择的限制性核酸内切酶也不同，所以这种实用 质粒就需要有多种限制性核酸内切酶的单一切割位点。 如质粒pET28b具有BamHⅠ、BglⅡ、HindⅢ等16种限制 性核酸内切酶的单一切割位点，若用BamHⅠ处理质粒 pET28b，在其产生的切口中插入ada形成重组质粒， 该重组质粒的另外15个限制性核酸内切酶识别位点都没 有插入ada。故C选项的含义错误。 现代生物技术：凝胶电泳 A．在DNA样本中加入一个或数个限制性核酸内切酶。这些酶把DNA切成小片段。 B．凝胶块一端有注入DNA样本的小孔，方 便注入样本；注入DNA样本后，对凝胶 (相当于固定溶液)施以电场。 C．片段迁移　带负电的DNA片段会朝正极迁移。片段越小，在凝胶中的迁移速度越快。因此小片段最后会离加样孔最远。 DNA重组技术(基因工程) 将人的生长激素基因